24小时热门版块排行榜    

查看: 2868  |  回复: 8

左眼

金虫 (小有名气)

[求助] pet28a N端去除 C端保留tag 已有1人参与

以pet28a为载体,表达的蛋白想保留 C端his tag(N端去除)。
想选择NcoI和XhoI,  不知道这两个酶效率怎么样?
又看到XhoI可能会导致移码,没看到原因或是到底移码多少? 不知道应该怎么设计才能避免移码保证C端顺利表达tag。
还有看到NcoI有不同种类,想问下NcoI HF和不带HF是有什么区别吗?我应该用什么样的呢?谢谢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

左眼

金虫 (小有名气)

我在NEB 网站上看见带HF的意思是酶经过。。。之后可以避免星号活性的意思是吧?
2楼2015-11-26 22:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
3楼2015-11-26 22:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
4楼2015-11-26 22:46:04
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

左眼

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 玉皇大帝捷哥 at 2015-11-26 22:46:04
移码很好解决的啊 一个氨基酸对应3个碱基 所以为了保证氨基酸不变你要在移码的地方人为加入碱基 酶切效率可以查看takara的产品目录那本书 有各种限制酶的双酶切效果
...

我知道三个碱基一个氨基酸 但是我不太明白为什么XhoI会导致移码?识别的序列是六个碱基,切完连上不还是六个碱基吗?XhoI是怎么导致移码的?
5楼2015-11-26 23:58:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
6楼2015-11-27 00:21:16
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
7楼2015-11-27 00:22:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
左眼: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢~ 2015-11-27 21:05:02
不知道楼主用的哪个公司的酶,之前用过takara的这两个酶,效率没问题。楼主你应该注意NcoI的移码吧,需要在酶切位点后加2个碱基,XhoI在你说的这种情况下不会造成移码
8楼2015-11-27 09:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zslqj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by a86052 at 2015-11-27 09:14:43
不知道楼主用的哪个公司的酶,之前用过takara的这两个酶,效率没问题。楼主你应该注意NcoI的移码吧,需要在酶切位点后加2个碱基,XhoI在你说的这种情况下不会造成移码

你好,我想问一下pET28a载体,酶切位点选用Hind3和Xho1,会移码吗?
9楼2017-05-27 13:35:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 左眼 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +6 chengyan1220 2026-08-21 6/300 2026-08-21 14:47 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见