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wenky

新虫 (正式写手)

[求助] Western-blot内参问题 已有1人参与

各位大侠好!刚做WB,(1)请问市售GAPDH、β-tubulin或actin内参一抗都所有真核生物能通用吗?还是需要自己做特异性多抗?(2)用刚做的抗兔一抗的血清做了一次WB,用的是重组大肠杆菌,结果杂带很多(注:抗体制备用蛋白由该菌纯化),是因为抗体未纯化的原因吗?
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wenky: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-12-16 21:41:55
你说的这几个内参基本上都可以用,真核生物比较保守。gapdh常用来做膜蛋白内参,actin比较通用。这几个内参大小不同,可以跟你的目的蛋白分开,这样进行选择。你的第二个问题说的好乱啊,没看懂,你再详细说一下吧

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2楼2016-12-15 17:42:04
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

又看了一遍。大概懂了。有没有标签抗体试一试呢?大肠杆菌一般都有 his,具体是不是再重复重复吧

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3楼2016-12-15 17:44:43
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wenky

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-12-15 17:44:43
又看了一遍。大概懂了。有没有标签抗体试一试呢?大肠杆菌一般都有 his,具体是不是再重复重复吧

多谢指点。又做了一遍,效果还可以,第一次杂带多应该是封闭效果不好所致。

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4楼2016-12-16 21:41:10
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wenky at 2016-12-16 21:41:10
多谢指点。又做了一遍,效果还可以,第一次杂带多应该是封闭效果不好所致。
...

客气了,

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5楼2016-12-16 22:38:07
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