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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Western-blot内参问题
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wenky

新虫 (正式写手)

[求助] Western-blot内参问题 已有1人参与

各位大侠好！刚做WB，（1）请问市售GAPDH、β-tubulin或actin内参一抗都所有真核生物能通用吗？还是需要自己做特异性多抗？（2）用刚做的抗兔一抗的血清做了一次WB，用的是重组大肠杆菌，结果杂带很多（注：抗体制备用蛋白由该菌纯化），是因为抗体未纯化的原因吗？
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1楼 2016-12-14 16:36:26
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wenky

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-12-15 17:44:43
又看了一遍。大概懂了。有没有标签抗体试一试呢？大肠杆菌一般都有 his，具体是不是再重复重复吧

多谢指点。又做了一遍，效果还可以，第一次杂带多应该是封闭效果不好所致。

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4楼2016-12-16 21:41:10
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wenky: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-12-16 21:41:55
你说的这几个内参基本上都可以用，真核生物比较保守。gapdh常用来做膜蛋白内参，actin比较通用。这几个内参大小不同，可以跟你的目的蛋白分开，这样进行选择。你的第二个问题说的好乱啊，没看懂，你再详细说一下吧

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2楼2016-12-15 17:42:04
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

又看了一遍。大概懂了。有没有标签抗体试一试呢？大肠杆菌一般都有 his，具体是不是再重复重复吧

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3楼2016-12-15 17:44:43
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wenky at 2016-12-16 21:41:10
多谢指点。又做了一遍，效果还可以，第一次杂带多应该是封闭效果不好所致。
...

客气了，

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5楼2016-12-16 22:38:07
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