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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » SYBR GREEN 扩增效果不理想，引物二聚体严重，求高人指点。
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neaushuai

木虫 (正式写手)
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SYBR GREEN 扩增效果不理想，引物二聚体严重，求高人指点。
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小虫最近用SYBR GREEN作qPCR，在用清水做空白对照时，一直起峰。琼脂糖凝胶电泳发现，引物二聚体严重，目地条带模糊。新手一个，求不吝赐教。

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1楼 2016-12-13 15:14:30
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以我多年做qPCR的经验。引物二聚体出现，是由多方面造成的。一：模板的问题，a RNA质量不好，包括降解严重等等 b RNA提取过程中，有机试剂没有除尽。如果有机试剂没有除尽，就会造成反转录效果出现问题。最后上机扩增就会出现引物二聚体。 二：引物的问题，这个可以通过扩增曲线和溶解曲线来综合判断。单峰,溶解曲线tm值在85左右，预实验NTC和样本的CT值之差要大于3这些都是衡量引物好坏的因素。希望能够对你有用。
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96楼2016-12-15 16:30:39
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zhchzhsh20762楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
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STM32F4073楼
2016-12-13 15:14   回复  
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jiehe8884楼
2016-12-13 15:14   回复  
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paperhunter5楼
2016-12-13 15:14   回复  
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Rambo90866楼
2016-12-13 15:14   回复  
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C.Dempsey7楼
2016-12-13 15:14   回复  
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wumatlab8楼
2016-12-13 15:14   回复  
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weishuang9楼
2016-12-13 15:14   回复  
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人生。。初见10楼
2016-12-13 15:14   回复  
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加油！！11楼
2016-12-13 15:14   回复  
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sjkzxmc12楼
2016-12-13 15:14   回复  
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qiukq198913楼
2016-12-13 15:15   回复  
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35067058014楼
2016-12-13 15:15   回复  
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