应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » SYBR Green I 会与ExoIII 之间会相互影响吗
71/1返回列表
查看: 530  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

分析-Legion

新虫 (小有名气)

[求助] SYBR Green I 会与ExoIII 之间会相互影响吗

1.在缓冲液中加入SYBR Green I 可以检测到较高的荧光强度（1379 au.）;当在缓冲液中加入ExoIII，水浴37℃后再加入SYBR Green I 十分钟后检测荧光强度时只有198.4.这可以说明ExoIII会和SYBR Green I反应吗？
2..我在加入Exo III 37摄氏度培育半个小时后 又将这个酶灭活了20min ，最后加入染料SG I，十分钟后检测荧光，荧光值还是很低，只有100多。应该怎么样才可以降低Exo III对SYBR Green I 的影响呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力向前，珍惜拥有。
1楼 2014-10-17 17:33:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09mzone

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

SYBR Green I 是要嵌入dsDNA以后才能发出荧光
ExoIII可以剪切3'到5'的dsDNA
所以SYBR Green I 在含有dsDNA中，会发强荧光，当有ExoIII存在时候，dsDNA被切断，荧光就没了。
赞一下 回复此楼
strive for excellent！
2楼2014-10-17 22:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分析-Legion

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 09mzone at 2014-10-17 22:27:00
SYBR Green I 是要嵌入dsDNA以后才能发出荧光
ExoIII可以剪切3'到5'的dsDNA
所以SYBR Green I 在含有dsDNA中，会发强荧光，当有ExoIII存在时候，dsDNA被切断，荧光就没了。

我做的是让SYBR Green I 嵌入G四联体里面发光，实验证明G四联体越多，加入相同量的SYBR Green I 得到的荧光强度也是越大的。
另外，我做的另一个实验：在形成G四联体后（G四浓度不断增加）加入相同量的Exo III 培育（目的是想证明Exo III不能水解G四联体），再加入相同量的SYBR Green I 培育就不会有逐渐增强的荧光强度，实验现象是在低浓度范围荧光强度都很低（接近于水平线），在中间浓度时（5mM）荧光强度达到最高值，然后随着G四浓度的增大，荧光强度是不断降低的。
这个实验我已经重复了很多次，每次都是这种现象，这是什么原因呢，是因为Exo III可能已经剪切了G四联体吗？
赞一下 回复此楼
努力向前，珍惜拥有。
3楼2014-10-18 09:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09mzone

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
分析-Legion: 金币+8 2014-10-19 15:18:19
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分析-Legion at 2014-10-18 09:54:01
我做的是让SYBR Green I 嵌入G四联体里面发光，实验证明G四联体越多，加入相同量的SYBR Green I 得到的荧光强度也是越大的。
另外，我做的另一个实验：在形成G四联体后（G四浓度不断增加）加入相同量的Exo III 培 ...

我觉得应该是固定G四，改变EXO3，再加入相同的SYBR Green1
赞一下 回复此楼
strive for excellent！
4楼2014-10-18 23:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

更深的蓝

木虫 (正式写手)
EXOIII没有不是严格的切割双链，实际上也能降解单链的，出现这种情况，应该是你的G4被EXOIII降解了，你可以跑个PAGE胶验证一下。
赞一下 回复此楼
低调务实！
5楼2014-10-20 08:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

更深的蓝

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2014-10-20 08:58:35
EXOIII没有不是严格的切割双链，实际上也能降解单链的，出现这种情况，应该是你的G4被EXOIII降解了，你可以跑个PAGE胶验证一下。

多打了个“没有”
赞一下 回复此楼
低调务实！
6楼2014-10-20 08:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分析-Legion

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2014-10-20 08:58:35
EXOIII没有不是严格的切割双链，实际上也能降解单链的，出现这种情况，应该是你的G4被EXOIII降解了，你可以跑个PAGE胶验证一下。

实验现象证明G四 连体没有被Exo III剪切，实在不知道为什么会出现这种现象。还是谢谢你的帮助。
赞一下 回复此楼
努力向前，珍惜拥有。
7楼2014-10-21 09:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 分析-Legion 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭