24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 601  |  回复: 6

分析-Legion

新虫 (小有名气)

[求助] SYBR Green I 会与ExoIII 之间会相互影响吗

1.在缓冲液中加入SYBR Green I 可以检测到较高的荧光强度(1379 au.);当在缓冲液中加入ExoIII,水浴37℃后再加入SYBR Green I 十分钟后检测荧光强度时只有198.4.这可以说明ExoIII会和SYBR Green I反应吗?
2..我在加入Exo III 37摄氏度培育半个小时后 又将这个酶灭活了20min ,最后加入染料SG I,十分钟后检测荧光,荧光值还是很低,只有100多。应该怎么样才可以降低Exo III对SYBR Green I 的影响呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

努力向前,珍惜拥有。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09mzone

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

SYBR Green I 是要嵌入dsDNA以后才能发出荧光
ExoIII可以剪切3'到5'的dsDNA
所以SYBR Green I 在含有dsDNA中,会发强荧光,当有ExoIII存在时候,dsDNA被切断,荧光就没了。
strive for excellent!
2楼2014-10-17 22:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分析-Legion

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 09mzone at 2014-10-17 22:27:00
SYBR Green I 是要嵌入dsDNA以后才能发出荧光
ExoIII可以剪切3'到5'的dsDNA
所以SYBR Green I 在含有dsDNA中,会发强荧光,当有ExoIII存在时候,dsDNA被切断,荧光就没了。

我做的是让SYBR Green I 嵌入G四联体里面发光,实验证明G四联体越多,加入相同量的SYBR Green I 得到的荧光强度也是越大的。
另外,我做的另一个实验:在形成G四联体后(G四浓度不断增加)加入相同量的Exo III 培育(目的是想证明Exo III不能水解G四联体),再加入相同量的SYBR Green I 培育就不会有逐渐增强的荧光强度,实验现象是在低浓度范围荧光强度都很低(接近于水平线),在中间浓度时(5mM)荧光强度达到最高值,然后随着G四浓度的增大,荧光强度是不断降低的。
这个实验我已经重复了很多次,每次都是这种现象,这是什么原因呢,是因为Exo III可能已经剪切了G四联体吗?
努力向前,珍惜拥有。
3楼2014-10-18 09:54:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09mzone

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
分析-Legion: 金币+8 2014-10-19 15:18:19
引用回帖:
3楼: Originally posted by 分析-Legion at 2014-10-18 09:54:01
我做的是让SYBR Green I 嵌入G四联体里面发光,实验证明G四联体越多,加入相同量的SYBR Green I 得到的荧光强度也是越大的。
另外,我做的另一个实验:在形成G四联体后(G四浓度不断增加)加入相同量的Exo III 培 ...

我觉得应该是固定G四,改变EXO3,再加入相同的SYBR Green1
strive for excellent!
4楼2014-10-18 23:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

EXOIII没有不是严格的切割双链,实际上也能降解单链的,出现这种情况,应该是你的G4被EXOIII降解了,你可以跑个PAGE胶验证一下。
低调务实!
5楼2014-10-20 08:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2014-10-20 08:58:35
EXOIII没有不是严格的切割双链,实际上也能降解单链的,出现这种情况,应该是你的G4被EXOIII降解了,你可以跑个PAGE胶验证一下。

多打了个“没有”
低调务实!
6楼2014-10-20 08:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分析-Legion

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2014-10-20 08:58:35
EXOIII没有不是严格的切割双链,实际上也能降解单链的,出现这种情况,应该是你的G4被EXOIII降解了,你可以跑个PAGE胶验证一下。

实验现象证明G四 连体没有被Exo III剪切,实在不知道为什么会出现这种现象。还是谢谢你的帮助。
努力向前,珍惜拥有。
7楼2014-10-21 09:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 分析-Legion 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 295求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-05 7/350 2026-04-11 19:02 by laoshidan
[考研] 0854求调剂 +7 assdll 2026-04-05 7/350 2026-04-11 10:34 by Delta2012
[考研] 生物学调剂 +8 小冉要努力 2026-04-10 9/450 2026-04-11 10:22 by wwj2530616
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:57 by zhq0425
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
[考研] 08600生物与医药-327 +10 18755400796 2026-04-05 10/500 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 085600材料与化工专硕329 求调剂 +24 额cc 2026-04-06 25/1250 2026-04-09 16:01 by wp06
[考研] 材料工程322 +18 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 19/950 2026-04-09 10:44 by cymywx
[考研] 材料科学与工程320求调剂,080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 一志愿吉大化学327求调剂 +12 王王白石 2026-04-06 13/650 2026-04-08 16:05 by luoyongfeng
[考研] 计算机408|在校多次国家级竞赛获奖|申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 专硕085403,291分,有两篇专利,一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 085602调剂 初试总分335 +3 19123253302 2026-04-06 3/150 2026-04-07 18:00 by jp9609
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 22408 318分求调剂 +4 勤奋的小笼包 2026-04-06 6/300 2026-04-07 15:05 by 纸鹤555
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 287分求调剂 有专利国奖一志愿哈工大085406 +6 白易辰 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:46 by 875465
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +10 cs0106 2026-04-05 12/600 2026-04-06 19:41 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见