24小时热门版块排行榜    

查看: 6176  |  回复: 101

neaushuai

木虫 (正式写手)


已领完
SYBR GREEN 扩增效果不理想,引物二聚体严重,求高人指点。
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫,下载小木虫客户端

小虫最近用SYBR GREEN作qPCR,在用清水做空白对照时,一直起峰。琼脂糖凝胶电泳发现,引物二聚体严重,目地条带模糊。新手一个,求不吝赐教。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小囧超超

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我发现好多人只领金币不帮忙

发自小木虫Android客户端
56楼2016-12-13 15:57:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Nirsara

金虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-14 22:31:58
有几个方法:1.引物重新设计,2.换个其他牌子的染料法酶,可能会减轻这种情况,3.退火温度重新摸索,别用两步法换三步法。

发自小木虫IOS客户端
91楼2016-12-13 17:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didongwei

金虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
重新设计引物,再看看

发自小木虫IOS客户端
54楼2016-12-13 15:46:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物用软件设计吧

发自小木虫IOS客户端
60楼2016-12-13 16:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangyangxqc

新虫 (小有名气)


75楼2016-12-13 16:40:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grase

捐助贵宾 (职业作家)


77楼2016-12-13 16:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neaushuai

木虫 (正式写手)


引用回帖:
54楼: Originally posted by didongwei at 2016-12-13 15:46:27
重新设计引物,再看看

引物经普通PCR效果很好,也很稳定,不知道一做定量就都是二聚体了。

发自小木虫Android客户端
84楼2016-12-13 16:51:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neaushuai

木虫 (正式写手)


引用回帖:
75楼: Originally posted by yangyangxqc at 2016-12-13 16:40:38
重新设计引物

是啊,又好气又好笑。

发自小木虫Android客户端
86楼2016-12-13 17:02:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neaushuai

木虫 (正式写手)


引用回帖:
56楼: Originally posted by 小囧超超 at 2016-12-13 15:57:49
我发现好多人只领金币不帮忙

是啊,又好气又好笑。

发自小木虫Android客户端
88楼2016-12-13 17:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小囧超超

新虫 (小有名气)


引用回帖:
88楼: Originally posted by neaushuai at 2016-12-13 17:02:36
是啊,又好气又好笑。
...

哈哈哈

发自小木虫Android客户端
90楼2016-12-13 17:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neaushuai

木虫 (正式写手)


引用回帖:
91楼: Originally posted by Nirsara at 2016-12-13 17:11:33
有几个方法:1.引物重新设计,2.换个其他牌子的染料法酶,可能会减轻这种情况,3.退火温度重新摸索,别用两步法换三步法。

已经用了bio-red和全式金的,下一步试试东洋之花的。好的,意见很中肯,多谢。

发自小木虫Android客户端
93楼2016-12-13 20:40:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Nirsara

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
93楼: Originally posted by neaushuai at 2016-12-13 20:40:00
已经用了bio-red和全式金的,下一步试试东洋之花的。好的,意见很中肯,多谢。
...

我们一直用的罗氏的,效果不错。但是我也注意到一点,就是有些引物或者模版可能不适合某种酶,联系多换两个试试

发自小木虫IOS客户端
94楼2016-12-13 22:14:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeyatouyhj

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物二聚体的Tm值一般在70多度,可以在延伸后,加一步79度,30s,清水起峰可能是被污染了,建议重新更换新的,或者如果CT值较小就不用去管,如果在85度左右有峰,可能是因为扩增效率不高,建议摸索一下退火温度,如果普通PCR产物就很低,建议更换引物
95楼2016-12-15 15:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以我多年做qPCR的经验。引物二聚体出现,是由多方面造成的。一:模板的问题,a RNA质量不好,包括降解严重等等 b RNA提取过程中,有机试剂没有除尽。如果有机试剂没有除尽,就会造成反转录效果出现问题。最后上机扩增就会出现引物二聚体。 二:引物的问题,这个可以通过扩增曲线和溶解曲线来综合判断。单峰,溶解曲线tm值在85左右,预实验NTC和样本的CT值之差要大于3这些都是衡量引物好坏的因素。希望能够对你有用。
96楼2016-12-15 16:30:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
多数都是引物不好所致,其它优化都是杯水车薪。软件看一下引物二聚体严不严重

发自小木虫Android客户端
97楼2016-12-15 18:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的也是 不知道怎么回事 我的是40个循环  空白ct在29左右
98楼2017-06-19 16:26:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)


引用回帖:
91楼: Originally posted by Nirsara at 2016-12-13 17:11:33
有几个方法:1.引物重新设计,2.换个其他牌子的染料法酶,可能会减轻这种情况,3.退火温度重新摸索,别用两步法换三步法。

3步法在第几步采集信号呢
99楼2017-06-19 16:27:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
97楼: Originally posted by xiaoyanzi517 at 2016-12-15 18:06:00
多数都是引物不好所致,其它优化都是杯水车薪。软件看一下引物二聚体严不严重

怎么用软件看引物二聚体严不严重呢?我的也是空白总是出,熔解曲线也不好。溶解曲线不好也会导致空白不正常吗?
100楼2017-06-19 17:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
STM32F4073楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
jiehe8884楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
Rambo90866楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
C.Dempsey7楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
wumatlab8楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
weishuang9楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
sjkzxmc12楼
2016-12-13 15:14   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
qiukq198913楼
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
35067058014楼
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
jiajia240016楼
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
xin198718楼
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
jixiangbao21楼
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
nidayede1222楼
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
zyy101023楼
2016-12-13 15:15   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
shewu24楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
wangjine27楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
talangzhe28楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
晟睿29楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
hkxj130楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
沙泽32楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
wbf3ng33楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
jancker11035楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
DF1136楼
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:16   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
cp_hhu40楼
2016-12-13 15:17   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
Silang41楼
2016-12-13 15:17   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:17   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
程小星43楼
2016-12-13 15:17   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:18   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
loubies45楼
2016-12-13 15:19   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:20   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
shaybing47楼
2016-12-13 15:21   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:25   回复  
2016-12-13 15:29   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:33   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:37   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:44   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
didongwei53楼
2016-12-13 15:45   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 15:57   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:59   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 15:59   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 16:00   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
Cobra892961楼
2016-12-13 16:03   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
sjf70012162楼
2016-12-13 16:04   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
davidann63楼
2016-12-13 16:07   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
王惠64楼
2016-12-13 16:07   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
lijdoc65楼
2016-12-13 16:15   回复  
mlxmiao66楼
2016-12-13 16:17   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
ajingne167楼
2016-12-13 16:18   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
hitzxf68楼
2016-12-13 16:19   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
梦想丁69楼
2016-12-13 16:27   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
seeker9170楼
2016-12-13 16:28   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
xijuandadi71楼
2016-12-13 16:31   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
liuxun500072楼
2016-12-13 16:38   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
spc0873楼
2016-12-13 16:38   回复  
2016-12-13 16:40   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
grase76楼
2016-12-13 16:40   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
spc0878楼
2016-12-13 16:41   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
2016-12-13 16:41   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 16:41   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
dudu201481楼
2016-12-13 16:45   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
dudu201482楼
2016-12-13 16:46   回复  
2016-12-13 16:49   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
2016-12-13 16:55   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
nbjiuxu87楼
2016-12-13 17:02   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
Nirsara89楼
2016-12-13 17:08   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
君恋多92楼
2016-12-13 17:12   回复  
neaushuai(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 neaushuai 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见