24小时热门版块排行榜    

查看: 1060  |  回复: 11

17826858802

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒重组 已有3人参与

我目的基因和载体割胶回收后跑胶鉴定都鉴定到了,16摄氏度连接过夜后转入TG1感受态,再双酶切鉴定的时候,只有一个菌落鉴定到了,但测序时没测到,求大神指点迷津。我的载体有5000bp,目的基因105bp

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-23 22:20:05
1、保证目的基因片段和载体片段的有效回收,回收后点样看一下回收效率
2、连接时要保证试剂的合理使用量
3、转化时感受态的活性要保证
2楼2016-10-22 12:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

17826858802

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-10-22 12:26:26
1、保证目的基因片段和载体片段的有效回收,回收后点样看一下回收效率
2、连接时要保证试剂的合理使用量
3、转化时感受态的活性要保证

我载体片段和目的基因割胶回收后测浓度为,载体12.5ng/uL,目的基因为2.4ng/uL,浓度测完后跑胶鉴定也跑到了条带,感受态细胞应该也是好的,因为我转化涂板后长出了很多菌斑,所以可能是连接出了问题,请问你前面说的连接试剂的合理使用是什么意思?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-10-23 16:15:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 17826858802 at 2016-10-23 16:15:24
我载体片段和目的基因割胶回收后测浓度为,载体12.5ng/uL,目的基因为2.4ng/uL,浓度测完后跑胶鉴定也跑到了条带,感受态细胞应该也是好的,因为我转化涂板后长出了很多菌斑,所以可能是连接出了问题,请问你前面说的 ...

你回收的浓度也太低了吧
···
4楼2016-10-23 19:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 17826858802 at 2016-10-23 16:15:24
我载体片段和目的基因割胶回收后测浓度为,载体12.5ng/uL,目的基因为2.4ng/uL,浓度测完后跑胶鉴定也跑到了条带,感受态细胞应该也是好的,因为我转化涂板后长出了很多菌斑,所以可能是连接出了问题,请问你前面说的 ...

就是连接体系中各试剂的用量,一般载体:目的片段=1:3,或者适当加大目的片段量
5楼2016-10-24 08:53:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

17826858802

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-23 19:30:54
你回收的浓度也太低了吧...

我目的基因只有105bp啊!

发自小木虫Android客户端
6楼2016-10-24 20:54:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

17826858802

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-10-24 08:53:56
就是连接体系中各试剂的用量,一般载体:目的片段=1:3,或者适当加大目的片段量...

哦哦,谢谢,我的载体和目的基因是按1:7加的,还是没连上,我在做一次吧

发自小木虫Android客户端
7楼2016-10-24 20:59:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 17826858802 at 2016-10-24 20:54:23
我目的基因只有105bp啊!
...

回收浓度和基因大小好像没有太大的关系
···
8楼2016-10-24 21:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

17826858802

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-24 21:08:49
回收浓度和基因大小好像没有太大的关系...

浓度是ng/uL,质量越大浓度越大啊

发自小木虫Android客户端
9楼2016-10-24 21:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 17826858802 at 2016-10-24 21:15:27
浓度是ng/uL,质量越大浓度越大啊
...

倒没注意过这个,学习了
···
10楼2016-10-24 21:25:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 17826858802 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见