应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒重组
51/1返回列表
查看: 1121  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

17826858802

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒重组 已有3人参与

我目的基因和载体割胶回收后跑胶鉴定都鉴定到了，16摄氏度连接过夜后转入TG1感受态，再双酶切鉴定的时候，只有一个菌落鉴定到了，但测序时没测到，求大神指点迷津。我的载体有5000bp,目的基因105bp

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-10-22 12:14:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

17826858802

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-10-24 08:53:56
就是连接体系中各试剂的用量，一般载体：目的片段=1：3，或者适当加大目的片段量...

哦哦，谢谢，我的载体和目的基因是按1:7加的，还是没连上，我在做一次吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-10-24 20:59:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

不爱做实验

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-23 22:20:05
1、保证目的基因片段和载体片段的有效回收，回收后点样看一下回收效率
2、连接时要保证试剂的合理使用量
3、转化时感受态的活性要保证
赞一下 回复此楼
2楼2016-10-22 12:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

17826858802

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-10-22 12:26:26
1、保证目的基因片段和载体片段的有效回收，回收后点样看一下回收效率
2、连接时要保证试剂的合理使用量
3、转化时感受态的活性要保证

我载体片段和目的基因割胶回收后测浓度为，载体12.5ng/uL,目的基因为2.4ng/uL,浓度测完后跑胶鉴定也跑到了条带，感受态细胞应该也是好的，因为我转化涂板后长出了很多菌斑，所以可能是连接出了问题，请问你前面说的连接试剂的合理使用是什么意思？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-10-23 16:15:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 17826858802 at 2016-10-23 16:15:24
我载体片段和目的基因割胶回收后测浓度为，载体12.5ng/uL,目的基因为2.4ng/uL,浓度测完后跑胶鉴定也跑到了条带，感受态细胞应该也是好的，因为我转化涂板后长出了很多菌斑，所以可能是连接出了问题，请问你前面说的 ...

你回收的浓度也太低了吧
赞一下 回复此楼
···
4楼2016-10-23 19:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +3 田洪有 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:38 by 杨杨杨紫
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭