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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助引物设计相关问题
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xms0422

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助引物设计相关问题 已有3人参与

本人生物学小白一个，然而毕业课题是这方面的，在设计引物时遇到了一些问题，请教各位大神。我需要P一段基因，并将其表达，是否只能从orf上面一段抄基因设计上游引物，从末端往前抄涉及下游引物，为什么在NCBI上设计引物会有在中间段开始的呢？另外，我从ATG往后和TAA往前分别设计了一段引物，但是GC含量较低，一条为35%,一条为47%，是否可行？GC含量低导致Tm值也较低，一条为54，一条为56.请教各位大神，这样设计出来的引物是否可行？
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1楼 2016-09-15 20:28:05
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xms0422

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuy111 at 2016-09-16 08:38:16
yes....

thank you very much

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5楼2016-09-16 10:35:06
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-16 07:57:05
Primer design depends on what sequence you need to amplify. The sequence of primer is depending on how to get  the results of specific DNA amplification. it is really case to case , you cannot guess why this primer works while mine doesnot . It is really need to see the situation of your gene. Please let me know what is going on.
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2楼2016-09-16 05:31:32
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xms0422

铁虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-16 07:57:11
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuy111 at 2016-09-16 05:31:32
Primer design depends on what sequence you need to amplify. The sequence of primer is depending on how to get  the results of specific DNA amplification. it is really case to case , you cannot guess  ...

谢谢，所以您的意思是就是根据最前面和最后面的基因设计的？GC含量等在这个时候不能要求太高？

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3楼2016-09-16 07:33:43
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yuy111

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xms0422 at 2016-09-16 07:33:43
谢谢，所以您的意思是就是根据最前面和最后面的基因设计的？GC含量等在这个时候不能要求太高？
...

yes.
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4楼2016-09-16 08:38:16
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