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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 【求助/交流】转基因作物pcr问题
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spirit-001

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】转基因作物pcr问题 已有3人参与

本人做转基因玉米旁侧序列
在根据转入基因（资料很少，只是那个做的人发的相关论文）
查找序列，设计了了一些引物 ，跑出来的条带和目的条带大小差很多，而且郑单958这种非转基因玉米中中都能出来。
根据做这个转基因玉米那个人的论文中的相关引物什么都没有p出来
老板一直让做下去
很迷茫 不知道怎么继续做下去
希望高手能给些帮助
谢谢
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1楼 2010-09-07 20:25:10
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tsingtao2008

木虫 (著名写手)

地球村村民
★ ★ ★
spirit-001(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2):鼓励交流，欢迎常来~~ 2010-09-08 08:33:58
spirit-001(金币+1): 2010-09-08 19:51:09
因为遗传背景不同（你与文献报道的受体物种不同），PCR结果不同并不令人奇怪。
理想的引物应该是非转基因材料扩增不出来，而阳性对照可以获得预期长度的产物（必要时测序）。
你需要做的就是多设计几对引物，优化扩增条件。

首先确认是转基因植物，然后再做侧翼序列。
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钱要流动，人要走动
2楼2010-09-08 08:32:06
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spirit-001

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by spirit-001 at 2010-09-07 20:25:10:
本人做转基因玉米旁侧序列
在根据转入基因（资料很少，只是那个做的人发的相关论文）
查找序列，设计了了一些引物 ，跑出来的条带和目的条带大小差很多，而且郑单958这种非转基因玉米中中都能出来。
根据做这 ...

这个 我明白  可是我现在没有确定的阳性样品
哎 转基因这种东西都有专利的 没正事商业化之前 人家估计啥都不透露啊
现在我这就在这里试试呢 很迷茫
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3楼2010-09-08 19:52:55
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
spirit-001(金币+1):谢谢参与
spirit-001(金币+1):谢谢 2010-09-10 10:38:49
别人发文章中的引物可能不对 这种情况是存在的 我也用过别人的文章中的引物扩增 结果什么都没有扩出来 我也是从玉米中扩增 玉米可能不好做吧
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4楼2010-09-08 19:56:30
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
spirit-001(金币+1):谢谢参与
spirit-001(金币+1): 2010-09-10 10:38:56
基因组的PCR有时候确实有点难，选个好的Taq很重要，我们以前用promega的P植物基因组重复性很差，经常扩不出来，换了ROCHE之后就相当稳定。不过ROCHE的tgo 高保真P cDNA 不好用。
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5楼2010-09-09 09:44:03
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
spirit-001(金币+1):谢谢参与
spirit-001(金币+1): 2010-09-10 10:38:58
换对引物，用PCR产物做模板
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一直向前！
6楼2010-09-09 10:30:53
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spirit-001

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by michaelwuqingyu at 2010-09-09 09:44:03:
基因组的PCR有时候确实有点难，选个好的Taq很重要，我们以前用promega的P植物基因组重复性很差，经常扩不出来，换了ROCHE之后就相当稳定。不过ROCHE的tgo 高保真P cDNA 不好用。

我们用的是Takara的 rtaq  应该是没问题的
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7楼2010-09-10 10:52:18
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
spirit-001(金币+1):谢谢参与
spirit-001(金币+1): 2010-09-10 18:17:46
引物上的文献好多都有问题的！！
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8楼2010-09-10 11:37:46
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半夏无毒

铁虫 (小有名气)
★
spirit-001(金币+1):谢谢参与
spirit-001(金币+1): 2010-09-10 18:17:52
看文献是做不出实验的~~~

只能根据文献,理清思路！
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9楼2010-09-10 11:43:17
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spirit-001

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 半夏无毒 at 2010-09-10 11:43:17:
看文献是做不出实验的~~~

只能根据文献,理清思路！

人家做的这个品种 得看他的引物啊  这个转基因新品种相关的也就做这个的人的啊  不看咋办啊  哎  
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10楼2010-09-10 16:06:25
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