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leilaxx金虫 (小有名气)
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纯化蛋白总是纯不出来 已有5人参与
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大家好。我按照师兄师姐的方法纯化蛋白，过镍柱后可以洗脱到75ml蛋白溶液，但是过完离子交换柱之后就没蛋白了，请问有哪些原因呢？ 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-09-13 10:02:31
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3楼2016-09-13 11:43:29
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4楼2016-09-13 12:58:22
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5楼2016-09-13 14:06:39
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6楼2016-09-14 09:38:50
xiaohaizi0220
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
不太明白你描述的问题，凭我的理解是你最终在特定离子浓度下没有收集到目标蛋白。如果我理解的对，可能的原因有很多：1、目标蛋白量太少，虽然你前一步纯化体积是75ml，但并不能说明蛋白量的多少。2、你没有在预期的离子浓度收集到你的蛋白，还可能是蛋白直接流穿了，根本就没有结合到柱子上，有可能是你的缓冲液不对，也可能是你选择的柱子不对。3、你没有在预期的离子浓度收集到你的蛋白，有可能是你洗脱的条件不对，你做的是连续梯度洗脱还是不连续洗脱，连续洗脱不存在这个可能性。如果是不连续洗脱你可以看看别的梯度有你的蛋白吗？我就先说这么多，纯化是个很费力的工作，坚韧是很有必要的。 建议你下次描述问题是可能尽量用科学用语，而不是大白话，你描述的越准确应助时越有针对性。  |
7楼2016-09-14 17:04:42
jzn2993
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8楼2016-09-15 11:14:07
leilaxx
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谢谢大家的帮忙！之前有几天没上小木虫所以没及时回复。在师姐的指导下，对破菌，洗杂的buffer都优化了，然后根据蛋白特性破菌前加了pmsf和dna酶，最后拿到了蛋白。因为该蛋白性质原因，一开始我按照自己纯以前别的蛋白的习惯去做，可能洗杂什么的都不是干净，所以导致蛋白过Q柱之后就不知道去哪里了（上样流穿部分不是目的蛋白），再次感谢大家的帮忙！ @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
9楼2016-09-28 12:42:13
hc-material
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10楼2016-09-29 10:48:08