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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA提取，求助
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yuwenjian99

铜虫 (小有名气)

[求助] DNA提取，求助 已有3人参与

最近在提取DNA，所用材料酚类和糖较多。开始用试剂盒提不出，后来用CTAB法和试剂盒相结合提取。CTAB一直做到氯仿异戊醇抽提两次，然后加GP2缓冲液。再过柱子。但最后跑电泳的时候，条带有，但是不清晰，不亮。是为什么？材料用的是0.1g。嫩叶

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1楼 2016-09-13 00:00:10
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loveming313

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-13 07:41:33
CTAB,去蛋白不是用酚氯仿抽提吗？

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Find the sunshine in your heart,let it go,you can get past the rainyday
2楼2016-09-13 01:00:19
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yuwenjian99

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveming313 at 2016-09-13 01:00:19
CTAB,去蛋白不是用酚氯仿抽提吗？

有酚氯仿。或者氯仿异戊醇啊

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3楼2016-09-13 09:38:22
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liugs

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuwenjian99: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-09-14 19:31:52
本帖内容被屏蔽
4楼2016-09-13 15:51:37
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-13 22:42:19
电泳能看到条带，基本后续实验没问题。
主要看后续做什么？CTAB肯定没问题，建议增加样本量，是液氮研磨的还是匀浆的？
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有你真好
5楼2016-09-13 16:28:32
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yuwenjian99

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by a314919473 at 2016-09-13 16:28:32
电泳能看到条带，基本后续实验没问题。
主要看后续做什么？CTAB肯定没问题，建议增加样本量，是液氮研磨的还是匀浆的？

后续要进行扩增，然后ssr标记。样品是液氮研磨的。样品量是0.1g

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6楼2016-09-13 19:07:06
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a314919473

银虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuwenjian99 at 2016-09-13 19:07:06
后续要进行扩增，然后ssr标记。样品是液氮研磨的。样品量是0.1g
...

可以增加样品量，液氮研磨会损失一些，SSR没问题，对DNA要求不高
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有你真好
7楼2016-09-14 08:34:05
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moon river

新虫 (小有名气)
我也是要做SSR标记   电泳出来稍有降解  但是260:230为0.2  特别低    不知道能不能用于SSR标记   我是用天根试剂盒提的

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8楼2016-09-14 12:50:22
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p53jun

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

加点纤维素酶消化掉难处理的非核酸部分？就如提取动物DNA，推荐蛋白酶K消化，过夜都行。注意加EDTA敖合DNA降解酶，提高寿命。
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9楼2016-09-16 21:16:55
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