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first1

木虫 (正式写手)

[求助] 目的蛋白无条带 已有1人参与

我最近在做WB,但是我的曝光后只有β-actin有条带,目的蛋白没有条带,我用的是santa的一抗(PKC-α、P-选择素、TGF-β1),稀释1:500,二抗稀释1:5000(用奶粉稀释的,有羊二抗和鼠二抗两种),转膜的时候有一点marker在凝胶上,但是膜上面的marker条带很清晰,我用过丽春红染色,但是没有观察到条带,也有可能是我的丽春红时间太久了。现在实验就这样停滞不前了,我是第一次做WB,但是操作都是老师指导 的。这个图就是曝光后的,其实下面还有三条膜,但是只有β-actin显示条带了。各位大神可否指点一二,我是在外地做实验,不是自己实验室,我想快点做完回我自己实验室。

目的蛋白无条带
1.jpg
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相信自己一定能做到!
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zhlch2016

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
first1: 金币+2 2016-09-02 17:14:27
β-actin有条带说明你的WB操作过程没有问题,你的蛋白样品是如何处理的?是组织里的蛋白还在自己异源表达的蛋白?
2楼2016-08-30 10:47:53
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first1

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhlch2016 at 2016-08-30 10:47:53
β-actin有条带说明你的WB操作过程没有问题,你的蛋白样品是如何处理的?是组织里的蛋白还在自己异源表达的蛋白?

细胞里面的蛋白,最近有条带了,但是不清晰,有的要曝光很久才会有条带,而且很淡
相信自己一定能做到!
3楼2016-09-02 17:14:22
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star013

新虫 (知名作家)


4楼2016-09-02 17:14:58
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HKK123

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by first1 at 2016-09-02 17:14:22
细胞里面的蛋白,最近有条带了,但是不清晰,有的要曝光很久才会有条带,而且很淡...

如果条带不清晰,你可以适当增加一抗二抗浓度。
有一种东西不能遵循从众原则,那就是良心。
5楼2016-09-02 22:17:38
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first1

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by HKK123 at 2016-09-02 22:17:38
如果条带不清晰,你可以适当增加一抗二抗浓度。...

好的,我再试一下
相信自己一定能做到!
6楼2016-09-04 12:54:44
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