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金虫 (正式写手)

[交流] western blot 问题

最近在做一个基因,WB检测表达量,我们是用片子曝光,每次化学发光的时候有特异型带,没有杂带,但是整张膜的背景很高,最近做了几次都是这种情况,刚开始以为是封闭时间太短,由封闭一小时变成了两小时(5%牛奶封闭),但是结果还是一样背景很高,导致有些带看的不是很清楚,同一张膜孵其他抗体就不会出现这种情况,我觉得可能是抗体出现的问题(抗体是用PBST配的),大家有没有碰到过这样的问题,有没有什么解决办法?

western blot 问题
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YoonChul

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by ghqiu09 at 2016-08-17 12:35:52
抗体用PBST稀释?不应该啊,应该用5%牛奶或者BSA

抗体稀释液不是固定的,除了你说的,还可以用TBST,具体的得看什么样子的抗体。
人类是唯一会脸红的动物,或是唯一该脸红的动物。
9楼2016-09-07 21:30:33
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查看全部 12 个回答

ghqiu09

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

3楼2016-08-17 12:35:52
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nicole8808

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
电泳和转膜可能没做好

发自小木虫IOS客户端
nicole
4楼2016-08-17 17:49:56
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nicole8808

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般抗体都是特异性的,杂交时不大会出问题,顶多可能杂交时温度控制

发自小木虫IOS客户端
nicole
5楼2016-08-17 17:52:26
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