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dengwy新虫 (小有名气)
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考马斯亮蓝法测蛋白质，标准曲线做不出来，不知是哪里出了问题 已有1人参与
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我采用考马斯亮蓝法测定样品中的蛋白质含量，仪器是752N型紫外可见分光光度计，采用牛血清白蛋白（sigma）做标准曲线，现在问题就出在标准曲线上。根据文献提供的方法： 1）称取5mg牛血清白蛋白粉末（sigma牌），加去离子水定容至50ml，配置0.1mg/ml的牛血清蛋白溶液； 2）称取100mg考马斯亮蓝G250试剂，先溶于50ml95%浓度的乙醇溶液中，然后再加入85%浓度的磷酸100ml，最后用去离子水定容至1000ml； 3）取6只试管分别加入0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml的牛血清蛋白溶液，并用去离子水定容至1.0ml； 4）向6只试管中加入5.0ml的考马斯亮蓝溶液，混合后静置2~5min； 5）将标准样品加入玻璃比色皿，用分光光度计测试样品在595nm处的吸光度值。 通过上述方法测出来的标准样品在蛋白浓度为0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0时的吸光度值分别为0；0.007；0.011；0.014；0.017；0.024。吸光度值很小，明显小于文献中报道的0.2~0.8范围内的测量值，而且线性也不理想。 为了提高吸光度值，将标准蛋白溶液浓度配制成1.0mg/ml，重复步骤2）~5），测出来的吸光度值反而更小（分别为0.024；0.001；0.000；0.000；0.001；-0.006），而且没有任何规律，重复做了几次都是如此。实在摸不清头绪，不知道哪个环节出了问题，请各位达人不吝赐教啊~~~~ |
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2楼2016-08-09 07:53:14
闲来小译
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dengwy
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