| 查看: 5127 | 回复: 7 | ||
dengwy新虫 (小有名气)
|
[求助]
考马斯亮蓝法测蛋白质，标准曲线做不出来，不知是哪里出了问题 已有1人参与
|
|
我采用考马斯亮蓝法测定样品中的蛋白质含量，仪器是752N型紫外可见分光光度计，采用牛血清白蛋白（sigma）做标准曲线，现在问题就出在标准曲线上。根据文献提供的方法： 1）称取5mg牛血清白蛋白粉末（sigma牌），加去离子水定容至50ml，配置0.1mg/ml的牛血清蛋白溶液； 2）称取100mg考马斯亮蓝G250试剂，先溶于50ml95%浓度的乙醇溶液中，然后再加入85%浓度的磷酸100ml，最后用去离子水定容至1000ml； 3）取6只试管分别加入0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml的牛血清蛋白溶液，并用去离子水定容至1.0ml； 4）向6只试管中加入5.0ml的考马斯亮蓝溶液，混合后静置2~5min； 5）将标准样品加入玻璃比色皿，用分光光度计测试样品在595nm处的吸光度值。 通过上述方法测出来的标准样品在蛋白浓度为0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0时的吸光度值分别为0；0.007；0.011；0.014；0.017；0.024。吸光度值很小，明显小于文献中报道的0.2~0.8范围内的测量值，而且线性也不理想。 为了提高吸光度值，将标准蛋白溶液浓度配制成1.0mg/ml，重复步骤2）~5），测出来的吸光度值反而更小（分别为0.024；0.001；0.000；0.000；0.001；-0.006），而且没有任何规律，重复做了几次都是如此。实在摸不清头绪，不知道哪个环节出了问题，请各位达人不吝赐教啊~~~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
职称评审没过，求安慰
已经有41人回复
-
回收溶剂求助
已经有7人回复
-
硝基苯如何除去
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有17人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有22人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有4人回复
-
求助文献
已经有3人回复
-
三无产品还有机会吗
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量
已经有3人回复
- 考马斯亮蓝法测定蛋白质
已经有3人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含时 吸光度值应在什么范围内效果好呢
已经有3人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质，麻烦进来看一下吧
已经有3人回复
- 求助考马斯亮蓝法测蛋白质的浓度
已经有6人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质
已经有18人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质，有几个迷惑的地方,求解？？？
已经有5人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量问题
已经有0人回复
- 考马斯亮蓝法测定蛋白质
已经有2人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量时三个平行测得的值相差很大求解
已经有5人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量-气泡问题
已经有1人回复
- 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的国标
已经有8人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量 中磷酸问题
已经有10人回复
- 求助：关于考马斯亮蓝法测定蛋白质
已经有23人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量 染色不均匀 好像没有溶解似地 怎么回事啊？
已经有13人回复
- 考马斯亮蓝法测蛋白质含量
已经有12人回复
- 请教一些关于考马斯亮蓝法测蛋白质含量的问题，请高手们多多指教，谢谢
已经有2人回复
- 【求助/交流】考马斯亮蓝法测蛋白质的含量
已经有0人回复
- 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测蛋白质含量
已经有4人回复
2楼2016-08-09 07:53:14
闲来小译
金虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1324.8
- 散金: 35
- 红花: 19
- 帖子: 661
- 在线: 231.6小时
- 虫号: 3861458
- 注册: 2015-05-11
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2016-08-09 08:31:59
dengwy
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 282.1
- 散金: 70
- 帖子: 69
- 在线: 57.7小时
- 虫号: 1538160
- 注册: 2011-12-15
- 专业: 可再生与替代能源利用中的
4楼2016-08-09 14:09:49
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2016-08-12 20:07:38
6楼2016-10-18 14:11:50
【答案】应助回帖
|
我现在做不出来标曲，就是按照你这个方法了，为什么你的值那么小，而我的确弄不出来，我前面两个都是零点零几，后面就零点一以上，请问考马斯溶液稀释后  对测定有影响吗发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-12-07 08:53:20
8楼2018-03-29 11:06:12