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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于Ni-NTA纯化蛋白
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tulipsy

铜虫 (正式写手)

[求助] 关于Ni-NTA纯化蛋白 已有1人参与

如题！
各位大侠！我的蛋白构建的是His-tag标签的，在用Ni柱纯化时，采用咪唑洗脱，但目的蛋白本身与咪唑配位了，导致我的蛋白没有活性。我想问问各位还有没有除咪唑之外其他的洗脱液呢？有没有试过的大侠啊？该怎样改进实验···求教啊！急急急！
我的蛋白等电点是7.1左右，上样蛋白是buffer pH为8.0。洗脱液pH也为8.0.
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1楼 2016-07-14 16:30:13
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tulipsy: 金币+50, ★★★很有帮助 2016-07-17 17:14:28
你实验如果有人做过，建议你多看看论文，多请教一下别人如何解决的，是没人做过的，目前纯化用的凝胶种类非常多，你看看这个实验http://wenku.baidu.com/link?url= ... OGVa5Y6tFdnm0r-dju_
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奋斗是我们前进的动力！
2楼2016-07-15 08:39:36
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
可以用阴离子交换层析

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3楼2016-07-15 13:21:11
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tulipsy

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xn8008 at 2016-07-15 08:39:36
你实验如果有人做过，建议你多看看论文，多请教一下别人如何解决的，是没人做过的，目前纯化用的凝胶种类非常多，你看看这个实验http://wenku.baidu.com/link?url=ovtZq8lbHl9SkQ4uKptV_Y4VSeLZgiwCZ-vm8rswU6G2UT- ...

好的，谢谢！

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4楼2016-07-16 08:40:39
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tulipsy

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2016-07-15 13:21:11
可以用阴离子交换层析

谢谢建议，我会试试。

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5楼2016-07-16 08:41:02
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tulipsy

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2016-07-15 13:21:11
可以用阴离子交换层析

谢谢啦，我会试一试
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6楼2016-07-17 17:14:50
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
洗脱以后溶液中有高浓度咪唑影响反应当然正常。。。。说蛋白和咪唑配位我也是醉了。。。。
用脱盐柱或者超滤除去咪唑再试试。
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7楼2016-07-19 08:30:55
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一笑中

铜虫 (正式写手)
7楼是正解，你需要脱盐处理

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8楼2016-07-19 09:48:36
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