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假人人

新虫 (小有名气)

[交流] 两个酶切位点buffer不同 已有16人参与

我在构载体的时候,两个酶切位点的buffer不一样,需要先用一个做酶切,然后跑胶回收后再用另一个酶做酶切,然后再跑胶,再回收,可是当我第二次酶切时由于浓度太低,跑胶是几乎都没带,请问各路大神该怎么办?

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假人人

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-07-11 09:57:16
1、加大第一次酶切及其回收的量,buffer可以综合考虑两种酶切效率均比较高的那个buffer
2、有时看不清楚条带,但是已知目的条带大小参考mark位置来直接切胶也可以,但不是十分建议这么做。

我用的是NEB的酶,酶切位点分别是Bgl II和Pml I。

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7楼2016-07-11 10:05:38
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查看全部 31 个回答

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-11 07:05:08
可以找一个最适合的buffer,有网站专门匹配的。

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2楼2016-07-11 00:35:14
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

你要知道,你每次切胶回收,都是在损耗的产物

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3楼2016-07-11 00:35:57
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781055707

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1,是提高模板浓度。2.用TAKARA的快酶,不用考虑BUFFER
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2016-07-11 09:51:54
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