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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 两个酶切位点buffer不同
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假人人

新虫 (小有名气)

[交流] 两个酶切位点buffer不同 已有16人参与

我在构载体的时候，两个酶切位点的buffer不一样，需要先用一个做酶切，然后跑胶回收后再用另一个酶做酶切，然后再跑胶，再回收，可是当我第二次酶切时由于浓度太低，跑胶是几乎都没带，请问各路大神该怎么办？

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1楼 2016-07-11 00:08:20
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781055707

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1，是提高模板浓度。2.用TAKARA的快酶，不用考虑BUFFER
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2016-07-11 09:51:54
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-11 07:05:08
可以找一个最适合的buffer，有网站专门匹配的。

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2楼2016-07-11 00:35:14
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
你要知道，你每次切胶回收，都是在损耗的产物

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3楼2016-07-11 00:35:57
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不爱做实验

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、加大第一次酶切及其回收的量，buffer可以综合考虑两种酶切效率均比较高的那个buffer
2、有时看不清楚条带，但是已知目的条带大小参考mark位置来直接切胶也可以，但不是十分建议这么做。
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5楼2016-07-11 09:57:16
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