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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

[求助] 目的蛋白能同时存在于上清和包涵体中吗? 已有6人参与

如题,上清和包涵体分离后跑电泳,结果包涵体蛋白浓度太低,只能看见一两个很暗淡的条带,无法与上清形成对比。但是上清中确实出现了目的条带,所以我想问下目的蛋白能同时存在于上清和包涵体中吗?
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上官abc

金虫 (正式写手)

2楼2016-07-06 10:09:54
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 鼓励发帖交流 2016-07-07 08:26:58
包涵体就是因为表达太快,来不及折叠形成的,有可能同时存在于上清和包涵体中的,我的蛋白就是上清和沉淀里面都有,但是上清里面量少,如果你想要可溶的蛋白的话,可以把温度降下来,17度20h
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
3楼2016-07-06 10:10:05
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
3楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-07-06 10:10:05
包涵体就是因为表达太快,来不及折叠形成的,有可能同时存在于上清和包涵体中的,我的蛋白就是上清和沉淀里面都有,但是上清里面量少,如果你想要可溶的蛋白的话,可以把温度降下来,17度20h

问题是包涵体蛋白浓度太低,电泳跑出来空白一片,细看才能看到2个杂蛋白条带,无法比较上清和包涵体中目的蛋白哪个更多......
4楼2016-07-06 10:14:31
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以的,我的蛋白就同时在上清和包涵体中
5楼2016-07-06 10:44:33
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 上官abc at 2016-07-06 10:14:31
问题是包涵体蛋白浓度太低,电泳跑出来空白一片,细看才能看到2个杂蛋白条带,无法比较上清和包涵体中目的蛋白哪个更多.........

我的意思,表达的时候把温度降低,时间延长,再试一次,看哪个量多
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
6楼2016-07-06 11:38:02
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励发帖交流 2016-07-07 08:27:11
这要看你使用的是什么载体了,带有信号肽的分泌型载体,内外都有是正常的,如果没有信号肽纯胞内表达载体话,出现在胞外的可能不大(或者说不常见),除非时间太长菌体自溶(这个跟蛋白质性质也有关)。可以看看载体的详细说明或文献。当然,实验就是发现新现象的,只要结果可以重复,怎么着都行,毕竟事实如此。
一品黄山
7楼2016-07-06 12:27:58
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

当然可以!只是含量可能不一样!

发自小木虫Android客户端
8楼2016-07-06 12:57:51
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的问题是如何提高表达量。就优化诱导条件。若要纯化出有活性的蛋白,就多优化让其在上清中,包涵体纯化比较麻烦,收率很低。祝顺利、
9楼2016-07-06 14:12:16
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
7楼: Originally posted by ls2046 at 2016-07-06 12:27:58
这要看你使用的是什么载体了,带有信号肽的分泌型载体,内外都有是正常的,如果没有信号肽纯胞内表达载体话,出现在胞外的可能不大(或者说不常见),除非时间太长菌体自溶(这个跟蛋白质性质也有关)。可以看看载体 ...

pET32a带不带信号肽?
10楼2016-07-06 18:05:43
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