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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 目的蛋白能同时存在于上清和包涵体中吗？
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

[求助] 目的蛋白能同时存在于上清和包涵体中吗？ 已有6人参与

如题，上清和包涵体分离后跑电泳，结果包涵体蛋白浓度太低，只能看见一两个很暗淡的条带，无法与上清形成对比。但是上清中确实出现了目的条带，所以我想问下目的蛋白能同时存在于上清和包涵体中吗？
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1楼 2016-07-06 09:15:46
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上官abc

金虫 (正式写手)
顶
2楼2016-07-06 10:09:54
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 鼓励发帖交流 2016-07-07 08:26:58
包涵体就是因为表达太快，来不及折叠形成的，有可能同时存在于上清和包涵体中的，我的蛋白就是上清和沉淀里面都有，但是上清里面量少，如果你想要可溶的蛋白的话，可以把温度降下来，17度20h
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
3楼2016-07-06 10:10:05
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
3楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-07-06 10:10:05
包涵体就是因为表达太快，来不及折叠形成的，有可能同时存在于上清和包涵体中的，我的蛋白就是上清和沉淀里面都有，但是上清里面量少，如果你想要可溶的蛋白的话，可以把温度降下来，17度20h

问题是包涵体蛋白浓度太低，电泳跑出来空白一片，细看才能看到2个杂蛋白条带，无法比较上清和包涵体中目的蛋白哪个更多......
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4楼2016-07-06 10:14:31
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以的，我的蛋白就同时在上清和包涵体中
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5楼2016-07-06 10:44:33
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 上官abc at 2016-07-06 10:14:31
问题是包涵体蛋白浓度太低，电泳跑出来空白一片，细看才能看到2个杂蛋白条带，无法比较上清和包涵体中目的蛋白哪个更多.........

我的意思，表达的时候把温度降低，时间延长，再试一次，看哪个量多
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
6楼2016-07-06 11:38:02
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励发帖交流 2016-07-07 08:27:11
这要看你使用的是什么载体了，带有信号肽的分泌型载体，内外都有是正常的，如果没有信号肽纯胞内表达载体话，出现在胞外的可能不大（或者说不常见），除非时间太长菌体自溶（这个跟蛋白质性质也有关）。可以看看载体的详细说明或文献。当然，实验就是发现新现象的，只要结果可以重复，怎么着都行，毕竟事实如此。
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一品黄山
7楼2016-07-06 12:27:58
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
当然可以！只是含量可能不一样！

发自小木虫Android客户端
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8楼2016-07-06 12:57:51
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的问题是如何提高表达量。就优化诱导条件。若要纯化出有活性的蛋白，就多优化让其在上清中，包涵体纯化比较麻烦，收率很低。祝顺利、
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9楼2016-07-06 14:12:16
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
7楼: Originally posted by ls2046 at 2016-07-06 12:27:58
这要看你使用的是什么载体了，带有信号肽的分泌型载体，内外都有是正常的，如果没有信号肽纯胞内表达载体话，出现在胞外的可能不大（或者说不常见），除非时间太长菌体自溶（这个跟蛋白质性质也有关）。可以看看载体 ...

pET32a带不带信号肽？
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10楼2016-07-06 18:05:43
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