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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请教大神质粒提取的问题
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欧小八

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教大神质粒提取的问题 已有6人参与

请问有谁用过 E.Z.N.A.® Endo-Free Plasmid Mini Kit I质粒提取试剂盒？一般用这个试剂盒提取出来的质粒浓度应该是多少？第一次做这个实验，做了两次浓度都太低了。用20ul的水溶解，OD260只有0.04。接下来本来要做双酶切连接shRNA模板。现在也做不成了。求大神指教。

请教大神质粒提取的问题
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1楼 2016-06-12 13:29:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我提取质粒一般只用了试剂盒里面的前三种溶液（任何试剂盒都有三种溶液，要么是solution I，solution II和solution III，或者Buffer P1，Buffer P2和Buffer P3等等啦，当然这三种溶液可以自己配，本人嫌麻烦就是用的试剂盒里面的），后面的就是嫁接的碱法提取法，从来不用带的柱子，一般3mL菌液提取的质粒大概是2000ng/uL*50uL左右，取1uL电泳检测效果蛮好，后续酶切转染稀释一下用，效果挺好的！
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没有做不到，只有想不到！
11楼2016-06-13 18:11:56
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xn8008: 金币+1, 支持有意义回帖 2016-06-12 19:57:51
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-13 12:47:30
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎积极回帖 2016-06-15 10:13:05
收集了多少菌液？有可能是菌液太少了。另外20μl，感觉太少了，洗脱水太少会影响洗脱量的。
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ATGC
2楼2016-06-12 13:45:31
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山中雨鱼

新虫 (小有名气)
可以将洗脱液加热，再过柱子，可过两次增加洗脱效率。还有注意裂解菌时是否都悬浮起来

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15楼2016-06-15 10:06:35
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普通回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-13 12:48:17
我一般是5-6ml菌液，用35-45ul水洗脱。正常情况下400ng/ul*40ul
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3楼2016-06-12 21:52:29
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zjsuiyuan

新虫 (初入文坛)
一般是菌液太少，实在不行，两管菌液提一管质粒

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4楼2016-06-12 22:33:32
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欧小八

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-06-12 21:52:29
我一般是5-6ml菌液，用35-45ul水洗脱。正常情况下400ng/ul*40ul

我也是5ml菌液提的。大概是洗脱的水用少了
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5楼2016-06-13 10:25:00
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欧小八

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2016-06-12 13:45:31
收集了多少菌液？有可能是菌液太少了。另外20μl，感觉太少了，洗脱水太少会影响洗脱量的。

5ml菌液。20ul的洗脱
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6楼2016-06-13 10:26:08
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欧小八

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zjsuiyuan at 2016-06-12 22:33:32
一般是菌液太少，实在不行，两管菌液提一管质粒

可以两管提一管质粒。那我是不是可以把这些质粒混合？
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7楼2016-06-13 10:27:20
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欧小八

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-06-12 21:52:29
我一般是5-6ml菌液，用35-45ul水洗脱。正常情况下400ng/ul*40ul

谢谢
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8楼2016-06-13 10:28:58
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super_mm

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 感谢您提出有意义的建议 2016-06-15 10:14:10
菌液多少ml不重要 重要的是浓度要高，正常摇的基础上再度摇一天到半天
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9楼2016-06-13 10:42:08
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vjebejw570
祝福
10楼2016-06-13 10:52:18
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