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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请教大神质粒提取的问题
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我提取质粒一般只用了试剂盒里面的前三种溶液（任何试剂盒都有三种溶液，要么是solution I，solution II和solution III，或者Buffer P1，Buffer P2和Buffer P3等等啦，当然这三种溶液可以自己配，本人嫌麻烦就是用的试剂盒里面的），后面的就是嫁接的碱法提取法，从来不用带的柱子，一般3mL菌液提取的质粒大概是2000ng/uL*50uL左右，取1uL电泳检测效果蛮好，后续酶切转染稀释一下用，效果挺好的！
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没有做不到，只有想不到！
11楼2016-06-13 18:11:56
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草溪河

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 欧小八 at 2016-06-13 10:26:08
5ml菌液。20ul的洗脱...

20ul洗脱是说明书上的吗？

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12楼2016-06-14 09:02:44
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液可能太少，或是操作不当。另外，最后一步用水溶解可以将第一次溶解的再一次过柱

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13楼2016-06-14 22:46:37
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flamingo小尹

新虫 (正式写手)
最多5微升菌液，浓度在一百到两百左右，在260有峰值

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14楼2016-06-14 22:54:31
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山中雨鱼

新虫 (小有名气)
可以将洗脱液加热，再过柱子，可过两次增加洗脱效率。还有注意裂解菌时是否都悬浮起来

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15楼2016-06-15 10:06:35
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bzzwx70
祝福
16楼2016-06-15 11:11:17
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欧小八

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 草溪河 at 2016-06-14 09:02:44
20ul洗脱是说明书上的吗？
...

不是，说明书上说30-50ul，我怕浓度太低了就用了20ul。
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17楼2016-06-15 22:06:36
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werq63

金虫 (著名写手)
有的质粒本身就提取的少，冻存的菌液可能提取不到质粒。还有就是手法问题，有没有按照说明书一步一步的做。我之前就有看错步骤的时候。

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18楼2016-06-15 22:18:35
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青青古董

新虫 (小有名气)
我们都是按照protocal上面的来做的

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19楼2016-06-16 09:23:38
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王平阳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by flamingo小尹 at 2016-06-14 22:54:31
最多5微升菌液，浓度在一百到两百左右，在260有峰值

美女，5毫升吧，哈哈
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没有做不到，只有想不到！
20楼2016-06-16 09:36:37
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