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米兔米兔

新虫 (小有名气)

[求助] RNA和DNA电泳问题求助 已有3人参与

用百分之2.5的琼脂糖,1*TBE缓冲液跑电泳,,有DNA和RNA,但是只能看到DNA条带,看不到RNA,请问DNA可以和RNA一起跑吗?怎样才能让他们同时出现条带?谢谢图中第3个孔是RNA

RNA和DNA电泳问题求助
2016.05.30 电泳图未跑出RNA 20160531093257.jpg
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yaohuaibing

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
米兔米兔: 金币+1, 有帮助 2016-06-03 11:41:20
RNA反转成CDNA PCR就可以和你的DNA一起跑胶了
每天都在读书和读人。书易懂,人难解。
2楼2016-05-31 10:14:24
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allenchem

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 应助指数+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-03 23:00:15
TBE一般都用0.5的,1*的盐浓度有些大吧。marker是D2000是吧,从图上看到的应该是RNA啊,没见到DNA。提DNA的时候是否使用了Rnase?提RNA的时候是否使用了dnase?如果使用了建议分开跑,除此之外电泳液和胶都的新配新换

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-31 10:15:10
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221345

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-03 22:59:59
缓冲液中没有加RNA酶抑制剂?不建议你一起跑胶,缓冲液的浓度有点大了
6楼2016-05-31 22:48:24
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yaohuaibing

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 米兔米兔 at 2016-05-31 12:05:49
谢谢您的回复。请问直接合成的RNA可以这样跑吗,还是有特别的要求呢...

电泳槽确保无RNA酶,注意电压100-120V不要过大,时间15min。你试试
每天都在读书和读人。书易懂,人难解。
7楼2016-06-01 09:29:24
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yaohuaibing at 2016-06-01 09:29:24
电泳槽确保无RNA酶,注意电压100-120V不要过大,时间15min。你试试...

我从没处理过电泳槽,跟这个一点关系都没有

发自小木虫Android客户端
8楼2016-06-01 18:41:24
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sunny0819

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 米兔米兔 at 2016-05-31 12:05:49
谢谢您的回复。请问直接合成的RNA可以这样跑吗,还是有特别的要求呢...

直接合成的RNA很容易被降解的,需要反转,否则不能和DNA一起跑

发自小木虫Android客户端
10楼2016-06-04 14:13:45
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普通回帖

米兔米兔

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by allenchem at 2016-05-31 10:15:10
TBE一般都用0.5的,1*的盐浓度有些大吧。marker是D2000是吧,从图上看到的应该是RNA啊,没见到DNA。提DNA的时候是否使用了Rnase?提RNA的时候是否使用了dnase?如果使用了建议分开跑,除此之外电泳液和胶都的新配新换 ...

你好,抱歉,我没有描述清楚,电泳中用的marker是20bp,RNA序列式合成的22个碱基的,不算marker的话是第二个孔,看不到条带的那个,第一个孔是DNA,DNA 也只有30多个碱基,第3 个孔是DNA和RNA 杂交的,RNA和DNA浓度都是1微摩尔,
4楼2016-05-31 12:04:16
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米兔米兔

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yaohuaibing at 2016-05-31 10:14:24
RNA反转成CDNA PCR就可以和你的DNA一起跑胶了

谢谢您的回复。请问直接合成的RNA可以这样跑吗,还是有特别的要求呢
5楼2016-05-31 12:05:49
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Fiona鳯

新虫 (初入文坛)

请问楼主,今天用Promega试剂盒提取细胞的DNA,在加异丙醇那一步时总是看不到线状的DNA,求教,为什么,我哪一步出问题了?有没有详细的 protocol??
9楼2016-06-03 16:40:53
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