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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR产物琼脂糖凝胶电泳
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razerw

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR产物琼脂糖凝胶电泳 已有4人参与

怎样才能做一块合格的胶，我见过很多文章里的琼脂糖电泳图跑的特别好。本人做胶连MARKER都跑不清楚，求教如何做一块好一点的胶，有什么经验和小窍门吗？希望各位虫虫给我支支招，谢谢了！
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1楼 2016-04-14 16:01:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:43:32
xn8008: 应助指数+1 2016-09-07 07:43:43
1X TAE和相应的琼脂糖配置。
先将其一次性煮沸，中间可以轻轻摇晃两三下--->再煮沸三次，每次沸腾即可，摇匀后再加热--->透彻没不溶物即可，然后可冲凉注意摇晃防止局部凝固，温度以手背可忍受为止，加入相应染料倒板---->放置15到20min可以用--->一般110V，15mins电泳绝大部分M的条带可以展开。
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2楼2016-04-14 17:11:53
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普通回帖

razerw

新虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:43:38
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-14 17:11:53
1X TAE和相应的琼脂糖配置。
先将其一次性煮沸，中间可以轻轻摇晃两三下--->再煮沸三次，每次沸腾即可，摇匀后再加热--->透彻没不溶物即可，然后可冲凉注意摇晃防止局部凝固，温度以手背可忍受为止，加入相应 ...

谢谢！

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3楼2016-04-17 08:41:57
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:43:57
我们实验室做胶一般都是用微波炉加热
这个过程一定要注意煮沸！！我在这上面栽过跟头。
此外缓冲液也要注意，我们用的是TAE缓冲液，成分百度上有的。
在倒入模具之前要摇匀
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谋事在人，成事在天
4楼2016-09-06 20:52:57
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:44:05
Agrose must be fully solved and got a clear solution after heating, pour it before agrose solution cold , hotter is better than colder . TAE buffer to run the gel should be fresh made, not reusable. Running current or voltage cannot be too high. Running time cannnot not too long.
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5楼2016-09-07 01:14:56
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razerw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by RNA世界 at 2016-09-06 20:52:57
我们实验室做胶一般都是用微波炉加热
这个过程一定要注意煮沸！！我在这上面栽过跟头。
此外缓冲液也要注意，我们用的是TAE缓冲液，成分百度上有的。
在倒入模具之前要摇匀

我每次都煮的特别充分，但跑出来的M总是没那么清晰。你们用百分之几的TAE，我用的是0.5%的

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6楼2016-09-08 07:57:14
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razerw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuy111 at 2016-09-07 01:14:56
Agrose must be fully solved and got a clear solution after heating, pour it before agrose solution cold , hotter is better than colder . TAE buffer to run the gel should be fresh made, not reusable.  ...

thank u so much！

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7楼2016-09-08 07:57:40
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tayifeita

木虫 (小有名气)
废话，放上去的图一般都修过好吗

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8楼2016-09-08 08:25:25
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by razerw at 2016-09-08 07:57:14
我每次都煮的特别充分，但跑出来的M总是没那么清晰。你们用百分之几的TAE，我用的是0.5%的
...

琼脂糖我们用的一般是1%de  TAE就是一般的1×啊
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谋事在人，成事在天
9楼2016-09-08 11:12:07
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L754919178

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先琼脂糖最好进口的，胶的质量才好。浓度百分之一，百分之二的胶，微波炉煮沸再震荡，反复两三次，里面不能有气泡。跑胶时电压100V，跑25分钟。EB里面染胶10分钟。之后的图片回顾非常清晰
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10楼2016-09-10 09:59:34
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