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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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razerw

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR产物琼脂糖凝胶电泳已有4人参与

怎样才能做一块合格的胶,我见过很多文章里的琼脂糖电泳图跑的特别好。本人做胶连MARKER都跑不清楚,求教如何做一块好一点的胶,有什么经验和小窍门吗?希望各位虫虫给我支支招,谢谢了!
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:43:32
xn8008: 应助指数+1 2016-09-07 07:43:43
1X TAE和相应的琼脂糖配置。
先将其一次性煮沸,中间可以轻轻摇晃两三下--->再煮沸三次,每次沸腾即可,摇匀后再加热--->透彻没不溶物即可,然后可冲凉注意摇晃防止局部凝固,温度以手背可忍受为止,加入相应染料倒板---->放置15到20min可以用--->一般110V,15mins电泳绝大部分M的条带可以展开。
2楼2016-04-14 17:11:53
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普通回帖

razerw

新虫 (初入文坛)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:43:38
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-14 17:11:53
1X TAE和相应的琼脂糖配置。
先将其一次性煮沸,中间可以轻轻摇晃两三下--->再煮沸三次,每次沸腾即可,摇匀后再加热--->透彻没不溶物即可,然后可冲凉注意摇晃防止局部凝固,温度以手背可忍受为止,加入相应 ...

谢谢!

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-04-17 08:41:57
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:43:57
我们实验室做胶一般都是用微波炉加热
这个过程一定要注意煮沸!!我在这上面栽过跟头。
此外缓冲液也要注意,我们用的是TAE缓冲液,成分百度上有的。
在倒入模具之前要摇匀
谋事在人,成事在天
4楼2016-09-06 20:52:57
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yuy111

银虫 (正式写手)


【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-09-07 07:44:05
Agrose must be fully solved and got a clear solution after heating, pour it before agrose solution cold , hotter is better than colder . TAE buffer to run the gel should be fresh made, not reusable. Running current or voltage cannot be too high. Running time cannnot not too long.
5楼2016-09-07 01:14:56
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razerw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by RNA世界 at 2016-09-06 20:52:57
我们实验室做胶一般都是用微波炉加热
这个过程一定要注意煮沸!!我在这上面栽过跟头。
此外缓冲液也要注意,我们用的是TAE缓冲液,成分百度上有的。
在倒入模具之前要摇匀

我每次都煮的特别充分,但跑出来的M总是没那么清晰。你们用百分之几的TAE,我用的是0.5%的

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-09-08 07:57:14
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razerw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yuy111 at 2016-09-07 01:14:56
Agrose must be fully solved and got a clear solution after heating, pour it before agrose solution cold , hotter is better than colder . TAE buffer to run the gel should be fresh made, not reusable.  ...

thank u so much!

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-09-08 07:57:40
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tayifeita

木虫 (小有名气)

废话,放上去的图一般都修过好吗

发自小木虫Android客户端
8楼2016-09-08 08:25:25
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by razerw at 2016-09-08 07:57:14
我每次都煮的特别充分,但跑出来的M总是没那么清晰。你们用百分之几的TAE,我用的是0.5%的
...

琼脂糖我们用的一般是1%de  TAE就是一般的1×啊
谋事在人,成事在天
9楼2016-09-08 11:12:07
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L754919178

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先琼脂糖最好进口的,胶的质量才好。浓度百分之一,百分之二的胶,微波炉煮沸再震荡,反复两三次,里面不能有气泡。跑胶时电压100V,跑25分钟。EB里面染胶10分钟。之后的图片回顾非常清晰
10楼2016-09-10 09:59:34
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