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licaixin2012新虫 (初入文坛)
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[求助]
植物dna提取问题求助 已有3人参与
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刚刚开始接触核算提取，真心求教 1.怎么改善叶片研磨后马上变成褐色？这种情况是里面的酚氧化了么？对后面除酚影响是不是很大？ 2.是把sds加到提取液里面好，还是分别配成提取液和裂解液？ 3.提取的dna呈褐色，且od比值偏小，酚氧化了？除酚加pvp还是巯基乙醇好？加的量怎么确定呢？ 发自小木虫Android客户端 |
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licaixin2012
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还有，我试图加入5%pvp200ul，但是还是被氧化了，沉淀仍然褐色，抽提过程中上清液始终是褐色，上清正常应该是什么颜色呢？防止酚氧化是加pvp好还是巯基乙醇好呢？有什么方法可以除酚吗？小白不懂，真心求教。谢谢 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-04-07 09:17:29
2楼2016-04-07 08:29:47
licaixin2012
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谢谢！ 1问，有什么方法可以尽量避免变色吗？我这个一管用0.5g叶片，量太少了，我想单独研磨损耗都有很多，我就一起研磨，然后再称每管0.5g，这样暴露的时间就长了，总是会变色。 2问，我师兄用的ctab法，我们老师叫我试用sds提，尽量不改变大方法 3问，是od260/od280偏小，蛋白质基本除尽了，主要就是氧化了的酚，沉淀是用的异丙醇，然后也用70%乙醇洗了三次。 另外我想问下我用的酚氯仿异戊醇溶液抽提三次，然后用氯仿异戊醇抽提两次，会不会残留酚也有一部分来自这里的酚？可以只用氯仿异戊醇抽提吗？会不会影响除蛋白效果？ 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-04-07 09:08:36
5楼2016-04-07 20:32:41
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