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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 植物dna提取问题求助
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licaixin2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物dna提取问题求助 已有3人参与

刚刚开始接触核算提取，真心求教
1.怎么改善叶片研磨后马上变成褐色？这种情况是里面的酚氧化了么？对后面除酚影响是不是很大？
2.是把sds加到提取液里面好，还是分别配成提取液和裂解液？
3.提取的dna呈褐色，且od比值偏小，酚氧化了？除酚加pvp还是巯基乙醇好？加的量怎么确定呢？

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1楼 2016-04-06 22:57:38
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-04-10 22:58:38
1、幼嫩叶片，取材及时提取，一旦氧化变色很难去除。
2、我们一般对于酚类多得部位提都是用CTAB法
3、OD260/230小？用70%乙醇洗两遍，然后尽可能干燥了再回溶。
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2楼2016-04-07 08:29:47
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licaixin2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-07 08:29:47
1、幼嫩叶片，取材及时提取，一旦氧化变色很难去除。
2、我们一般对于酚类多得部位提都是用CTAB法
3、OD260/230小？用70%乙醇洗两遍，然后尽可能干燥了再回溶。

谢谢！
1问，有什么方法可以尽量避免变色吗？我这个一管用0.5g叶片，量太少了，我想单独研磨损耗都有很多，我就一起研磨，然后再称每管0.5g，这样暴露的时间就长了，总是会变色。
2问，我师兄用的ctab法，我们老师叫我试用sds提，尽量不改变大方法
3问，是od260/od280偏小，蛋白质基本除尽了，主要就是氧化了的酚，沉淀是用的异丙醇，然后也用70%乙醇洗了三次。

另外我想问下我用的酚氯仿异戊醇溶液抽提三次，然后用氯仿异戊醇抽提两次，会不会残留酚也有一部分来自这里的酚？可以只用氯仿异戊醇抽提吗？会不会影响除蛋白效果？

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3楼2016-04-07 09:08:36
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licaixin2012

新虫 (初入文坛)
还有，我试图加入5%pvp200ul，但是还是被氧化了，沉淀仍然褐色，抽提过程中上清液始终是褐色，上清正常应该是什么颜色呢？防止酚氧化是加pvp好还是巯基乙醇好呢？有什么方法可以除酚吗？小白不懂，真心求教。谢谢

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4楼2016-04-07 09:17:29
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卡维斯

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-04-10 22:59:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by licaixin2012 at 2016-04-07 09:08:36
谢谢！
1问，有什么方法可以尽量避免变色吗？我这个一管用0.5g叶片，量太少了，我想单独研磨损耗都有很多，我就一起研磨，然后再称每管0.5g，这样暴露的时间就长了，总是会变色。
2问，我师兄用的ctab法，我们老师 ...

1.你可以取1g，要求不严的话，研磨完了放一半进管。
2.加巯基乙醇试试
3.260/280小是蛋白和酚类的原因，关键还是去酚防氧化

我提作物叶片直接用的氯仿，用的CTAB法，加巯基乙醇，结果260/280在1.8--1.85之间，260/230在1.95以上
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5楼2016-04-07 20:32:41
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by licaixin2012 at 2016-04-07 09:17:29
还有，我试图加入5%pvp200ul，但是还是被氧化了，沉淀仍然褐色，抽提过程中上清液始终是褐色，上清正常应该是什么颜色呢？防止酚氧化是加pvp好还是巯基乙醇好呢？有什么方法可以除酚吗？小白不懂，真心求教。谢谢
...

CTAB的配方里面加上巯基乙醇基本都包含了去酚防氧化。
上清怎么形容呢，上清应该是淡淡的浅黄色，透明的很好看
我的CTAB里有PVP4000。外带加了巯基乙醇。
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6楼2016-04-07 20:36:37
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licaixin2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-07 20:32:41
1.你可以取1g，要求不严的话，研磨完了放一半进管。
2.加巯基乙醇试试
3.260/280小是蛋白和酚类的原因，关键还是去酚防氧化

我提作物叶片直接用的氯仿，用的CTAB法，加巯基乙醇，结果260/280在1.8--1.85之间， ...

直接用氯仿吗？我看文献说的都是酚氯仿异戊醇或者氯仿异戊醇，在这一点上，sds和ctab法差别大吗？

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7楼2016-04-07 20:43:06
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licaixin2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-07 20:36:37
CTAB的配方里面加上巯基乙醇基本都包含了去酚防氧化。
上清怎么形容呢，上清应该是淡淡的浅黄色，透明的很好看
我的CTAB里有PVP4000。外带加了巯基乙醇。...

你是说要pvp和巯基乙醇一起用，sds法也可以学ctab法这样一起用这两种物质吗？

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8楼2016-04-07 20:46:20
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by licaixin2012 at 2016-04-07 20:46:20
你是说要pvp和巯基乙醇一起用，sds法也可以学ctab法这样一起用这两种物质吗？
...

其实你的步骤基本就是CTAB的步骤了，SDS法是不用抽提的，你只不过是把里面的成分CTAB换成了SDS，我建议还是用CTAB吧。
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9楼2016-04-07 21:11:42
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huayueyang

新虫 (小有名气)
液氮充分覆盖住样品，PVP,巯基乙醇

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坚持！
10楼2016-04-07 21:15:55
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