应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 植物dna提取问题求助
321/4返回列表1234下一页
查看: 1869  |  回复: 31
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

licaixin2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物dna提取问题求助 已有3人参与

刚刚开始接触核算提取，真心求教
1.怎么改善叶片研磨后马上变成褐色？这种情况是里面的酚氧化了么？对后面除酚影响是不是很大？
2.是把sds加到提取液里面好，还是分别配成提取液和裂解液？
3.提取的dna呈褐色，且od比值偏小，酚氧化了？除酚加pvp还是巯基乙醇好？加的量怎么确定呢？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-04-06 22:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-04-10 22:58:38
1、幼嫩叶片，取材及时提取，一旦氧化变色很难去除。
2、我们一般对于酚类多得部位提都是用CTAB法
3、OD260/230小？用70%乙醇洗两遍，然后尽可能干燥了再回溶。
赞一下 回复此楼
2楼2016-04-07 08:29:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

licaixin2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-07 08:29:47
1、幼嫩叶片，取材及时提取，一旦氧化变色很难去除。
2、我们一般对于酚类多得部位提都是用CTAB法
3、OD260/230小？用70%乙醇洗两遍，然后尽可能干燥了再回溶。

谢谢！
1问，有什么方法可以尽量避免变色吗？我这个一管用0.5g叶片，量太少了，我想单独研磨损耗都有很多，我就一起研磨，然后再称每管0.5g，这样暴露的时间就长了，总是会变色。
2问，我师兄用的ctab法，我们老师叫我试用sds提，尽量不改变大方法
3问，是od260/od280偏小，蛋白质基本除尽了，主要就是氧化了的酚，沉淀是用的异丙醇，然后也用70%乙醇洗了三次。

另外我想问下我用的酚氯仿异戊醇溶液抽提三次，然后用氯仿异戊醇抽提两次，会不会残留酚也有一部分来自这里的酚？可以只用氯仿异戊醇抽提吗？会不会影响除蛋白效果？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-07 09:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

licaixin2012

新虫 (初入文坛)
还有，我试图加入5%pvp200ul，但是还是被氧化了，沉淀仍然褐色，抽提过程中上清液始终是褐色，上清正常应该是什么颜色呢？防止酚氧化是加pvp好还是巯基乙醇好呢？有什么方法可以除酚吗？小白不懂，真心求教。谢谢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-04-07 09:17:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-04-10 22:59:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by licaixin2012 at 2016-04-07 09:08:36
谢谢！
1问，有什么方法可以尽量避免变色吗？我这个一管用0.5g叶片，量太少了，我想单独研磨损耗都有很多，我就一起研磨，然后再称每管0.5g，这样暴露的时间就长了，总是会变色。
2问，我师兄用的ctab法，我们老师 ...

1.你可以取1g，要求不严的话，研磨完了放一半进管。
2.加巯基乙醇试试
3.260/280小是蛋白和酚类的原因，关键还是去酚防氧化

我提作物叶片直接用的氯仿，用的CTAB法，加巯基乙醇，结果260/280在1.8--1.85之间，260/230在1.95以上
赞一下 回复此楼
5楼2016-04-07 20:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by licaixin2012 at 2016-04-07 09:17:29
还有，我试图加入5%pvp200ul，但是还是被氧化了，沉淀仍然褐色，抽提过程中上清液始终是褐色，上清正常应该是什么颜色呢？防止酚氧化是加pvp好还是巯基乙醇好呢？有什么方法可以除酚吗？小白不懂，真心求教。谢谢
...

CTAB的配方里面加上巯基乙醇基本都包含了去酚防氧化。
上清怎么形容呢，上清应该是淡淡的浅黄色，透明的很好看
我的CTAB里有PVP4000。外带加了巯基乙醇。
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-07 20:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

licaixin2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-07 20:32:41
1.你可以取1g，要求不严的话，研磨完了放一半进管。
2.加巯基乙醇试试
3.260/280小是蛋白和酚类的原因，关键还是去酚防氧化

我提作物叶片直接用的氯仿，用的CTAB法，加巯基乙醇，结果260/280在1.8--1.85之间， ...

直接用氯仿吗？我看文献说的都是酚氯仿异戊醇或者氯仿异戊醇，在这一点上，sds和ctab法差别大吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-04-07 20:43:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

licaixin2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-07 20:36:37
CTAB的配方里面加上巯基乙醇基本都包含了去酚防氧化。
上清怎么形容呢，上清应该是淡淡的浅黄色，透明的很好看
我的CTAB里有PVP4000。外带加了巯基乙醇。...

你是说要pvp和巯基乙醇一起用，sds法也可以学ctab法这样一起用这两种物质吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-04-07 20:46:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by licaixin2012 at 2016-04-07 20:46:20
你是说要pvp和巯基乙醇一起用，sds法也可以学ctab法这样一起用这两种物质吗？
...

其实你的步骤基本就是CTAB的步骤了，SDS法是不用抽提的，你只不过是把里面的成分CTAB换成了SDS，我建议还是用CTAB吧。
赞一下 回复此楼
9楼2016-04-07 21:11:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huayueyang

新虫 (小有名气)
液氮充分覆盖住样品，PVP,巯基乙醇

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
坚持！
10楼2016-04-07 21:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 licaixin2012 的主题更新
321/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+3 winsaint 2026-08-27 7/350 2026-08-28 07:06 by hejicker
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭