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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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licaixin2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物dna提取问题求助 已有3人参与

刚刚开始接触核算提取,真心求教
1.怎么改善叶片研磨后马上变成褐色?这种情况是里面的酚氧化了么?对后面除酚影响是不是很大?
2.是把sds加到提取液里面好,还是分别配成提取液和裂解液?
3.提取的dna呈褐色,且od比值偏小,酚氧化了?除酚加pvp还是巯基乙醇好?加的量怎么确定呢?

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licaixin2012

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-07 08:29:47
1、幼嫩叶片,取材及时提取,一旦氧化变色很难去除。
2、我们一般对于酚类多得部位提都是用CTAB法
3、OD260/230小?用70%乙醇洗两遍,然后尽可能干燥了再回溶。

谢谢!
1问,有什么方法可以尽量避免变色吗?我这个一管用0.5g叶片,量太少了,我想单独研磨损耗都有很多,我就一起研磨,然后再称每管0.5g,这样暴露的时间就长了,总是会变色。
2问,我师兄用的ctab法,我们老师叫我试用sds提,尽量不改变大方法
3问,是od260/od280偏小,蛋白质基本除尽了,主要就是氧化了的酚,沉淀是用的异丙醇,然后也用70%乙醇洗了三次。

另外我想问下我用的酚氯仿异戊醇溶液抽提三次,然后用氯仿异戊醇抽提两次,会不会残留酚也有一部分来自这里的酚?可以只用氯仿异戊醇抽提吗?会不会影响除蛋白效果?

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3楼2016-04-07 09:08:36
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-04-10 22:58:38
1、幼嫩叶片,取材及时提取,一旦氧化变色很难去除。
2、我们一般对于酚类多得部位提都是用CTAB法
3、OD260/230小?用70%乙醇洗两遍,然后尽可能干燥了再回溶。
2楼2016-04-07 08:29:47
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licaixin2012

新虫 (初入文坛)

还有,我试图加入5%pvp200ul,但是还是被氧化了,沉淀仍然褐色,抽提过程中上清液始终是褐色,上清正常应该是什么颜色呢?防止酚氧化是加pvp好还是巯基乙醇好呢?有什么方法可以除酚吗?小白不懂,真心求教。谢谢

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4楼2016-04-07 09:17:29
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卡维斯

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-04-10 22:59:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by licaixin2012 at 2016-04-07 09:08:36
谢谢!
1问,有什么方法可以尽量避免变色吗?我这个一管用0.5g叶片,量太少了,我想单独研磨损耗都有很多,我就一起研磨,然后再称每管0.5g,这样暴露的时间就长了,总是会变色。
2问,我师兄用的ctab法,我们老师 ...

1.你可以取1g,要求不严的话,研磨完了放一半进管。
2.加巯基乙醇试试
3.260/280小是蛋白和酚类的原因,关键还是去酚防氧化

我提作物叶片直接用的氯仿,用的CTAB法,加巯基乙醇,结果260/280在1.8--1.85之间,260/230在1.95以上
5楼2016-04-07 20:32:41
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