应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 多点突变求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
211/3返回列表123下一页
查看: 2382  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jiangpozi

新虫 (小有名气)

[求助] 多点突变求助 已有3人参与

各位大侠好，我已经用质粒扩增，DPNI消化，然后转化获得了单点突变质粒，现在想要在突变3个位点，还用这种方法做，那怎么做呢?
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-05 14:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

猛兽

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-05 22:55:35
请问可以这么做吗？引物之间退火温度不一样，还有它们会连起来吗？...

可以以构建好的质粒为模板再一个一个构建，当然这样做很麻烦，需要三次克隆构建过程。如果这三个突变之间的距离较远可以设计三对突变引物，先分别扩增四个片段，然后再将这四个片段放到一起使用两端引物进行搭桥扩增即可。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2016-04-06 08:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江苏虞游

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-15 15:21:28
主要是我现在设计的是DPNI消化的方法，而且片段都在质粒上了...

那方法一样的，质粒不大的话就可以直接设计引物做overlap，再用酶消化即可。如果质粒太大，建议把你的片段从质粒上切下来做完突变再连进去，我个人推荐后者

发自小木虫IOS客户端
赞一下(2人) 回复此楼
14楼2016-04-15 22:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jiangpozi

新虫 (小有名气)
有没有人指导下呢
赞一下 回复此楼
2楼2016-04-05 15:04:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-05 20:50:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2016-04-05 20:50:29
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

请问可以这么做吗？引物之间退火温度不一样，还有它们会连起来吗？
赞一下 回复此楼
4楼2016-04-05 22:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 猛兽 at 2016-04-06 08:10:08
可以以构建好的质粒为模板再一个一个构建，当然这样做很麻烦，需要三次克隆构建过程。如果这三个突变之间的距离较远可以设计三对突变引物，先分别扩增四个片段，然后再将这四个片段放到一起使用两端引物进行搭桥扩 ...

谢谢你的热心帮助。现在我是构键好了一个突变体，而且设计的引物都是根据质粒扩增来设计的，看到多点突变试剂盒中也是把几对引物一起放进去，不知道扩增的片段是怎么连接起来的？
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-06 09:56:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeruge

新虫 (小有名气)
用全式金无缝克隆试剂盒，设计在突变位点设计三对引物即可，但是引物设计要根据说明书来设计，属于特殊引物。还有不懂，再问

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-04-07 07:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yeruge at 2016-04-07 07:45:34
用全式金无缝克隆试剂盒，设计在突变位点设计三对引物即可，但是引物设计要根据说明书来设计，属于特殊引物。还有不懂，再问

谢谢！我已经设计了三段引物了，都是按照突变体引物原则设计的，没有试剂盒，和做单点突变一样吗？？
赞一下 回复此楼
8楼2016-04-07 09:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeruge

新虫 (小有名气)
不一样的

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2016-04-07 12:13:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yeruge at 2016-04-07 12:13:46
不一样的

那我 能用现在的引物取做吗？
赞一下 回复此楼
10楼2016-04-07 13:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangpozi 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-04-02 5/250 2026-04-03 01:06 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿0817化学工程与技术，求调剂 +7 我不是只因 2026-04-02 8/400 2026-04-03 00:15 by 雨天撑伞
[考研] 302求调剂 +9 zyx上岸！ 2026-04-02 9/450 2026-04-02 23:07 by 马儿快快地跑
[考研] 280求调剂 +13 咕噜晓晓 2026-04-02 14/700 2026-04-02 22:53 by 无际的草原
[考研] 一志愿深大085601材料工程专业（专硕）300分可以调剂去哪 +7 10160315 2026-04-02 7/350 2026-04-02 22:48 by liveagain126
[考研] 312 化工或制药调剂 +7 小小墨123 2026-04-02 8/400 2026-04-02 22:15 by ZXlzxl0425
[考研] 085600，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 277求调剂 +3 12A3 2026-04-02 3/150 2026-04-02 21:30 by swb0218
[考研] 342求调剂 +16 Mary Keen 2026-03-28 17/850 2026-04-02 21:14 by 690616278
[考研] 348求调剂 +11 zzzzyk123 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:52 by Wang200018
[考研] 298求B区调剂 +4 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-02 12:17 by 土木硕士招生
[考研] 327求调剂 +9 汲亦昊 2026-03-29 9/450 2026-04-02 11:44 by 运气yunqi
[考研] 085900土木水利336分求调剂 +4 Zhangjiangj 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:40 by 1753564080
[考研] 计算机265跨调环境 +5 Yumeng_6 2026-03-27 5/250 2026-04-02 10:54 by guanxin1001
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +4 嘿嘿uu 2026-04-01 4/200 2026-04-01 20:42 by 无懈可击111
[考研] 282求调剂 不挑专业 求收留 +4 Yam. 2026-03-30 5/250 2026-03-31 14:41 by 王亮_大连医科大
[考研] 286求调剂 +6 Faune 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:37 by jp9609
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +8 哇呼哼呼哼 2026-03-27 10/500 2026-03-31 13:35 by Huaxue_Wang
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭