[求助] 多点突变求助已有3人参与

3楼: Originally posted by biosci at 2016-04-05 20:50:29
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

5楼: Originally posted by 猛兽 at 2016-04-06 08:10:08
可以以构建好的质粒为模板再一个一个构建，当然这样做很麻烦，需要三次克隆构建过程。如果这三个突变之间的距离较远可以设计三对突变引物，先分别扩增四个片段，然后再将这四个片段放到一起使用两端引物进行搭桥扩 ...

7楼: Originally posted by yeruge at 2016-04-07 07:45:34
用全式金无缝克隆试剂盒，设计在突变位点设计三对引物即可，但是引物设计要根据说明书来设计，属于特殊引物。还有不懂，再问

9楼: Originally posted by yeruge at 2016-04-07 12:13:46
不一样的

12楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-09 12:39:28
可以用overlap PCR，想突变几个就突变几个

14楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-15 22:35:48
那方法一样的，质粒不大的话就可以直接设计引物做overlap，再用酶消化即可。如果质粒太大，建议把你的片段从质粒上切下来做完突变再连进去，我个人推荐后者
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16楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-18 13:35:01
那我建议你把片段切下来，纯化出来当作模板，突变之后再连进去就可以了
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18楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-21 12:51:47
第一个突变质粒测序了吗？
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