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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 多点突变求助
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

[求助] 多点突变求助 已有3人参与

各位大侠好，我已经用质粒扩增，DPNI消化，然后转化获得了单点突变质粒，现在想要在突变3个位点，还用这种方法做，那怎么做呢?
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1楼 2016-04-05 14:56:12
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-18 13:35:01
那我建议你把片段切下来，纯化出来当作模板，突变之后再连进去就可以了
...

我现在是以一个突变体质粒为模板，再P另一个突变体，但是测序发现本来以突变体为模板的那个突变点又变回原来的了，得到的只有一个点的突变，这好郁闷啊！
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17楼2016-04-20 14:38:13
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
有没有人指导下呢
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2楼2016-04-05 15:04:41
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-04-05 20:50:29
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2016-04-05 20:50:29
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

请问可以这么做吗？引物之间退火温度不一样，还有它们会连起来吗？
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4楼2016-04-05 22:55:35
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