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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 多点突变求助
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

[求助] 多点突变求助 已有3人参与

各位大侠好，我已经用质粒扩增，DPNI消化，然后转化获得了单点突变质粒，现在想要在突变3个位点，还用这种方法做，那怎么做呢?
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1楼 2016-04-05 14:56:12
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-04-05 20:50:29
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
有没有人指导下呢
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2楼2016-04-05 15:04:41
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2016-04-05 20:50:29
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

请问可以这么做吗？引物之间退火温度不一样，还有它们会连起来吗？
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4楼2016-04-05 22:55:35
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猛兽

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-05 22:55:35
请问可以这么做吗？引物之间退火温度不一样，还有它们会连起来吗？...

可以以构建好的质粒为模板再一个一个构建，当然这样做很麻烦，需要三次克隆构建过程。如果这三个突变之间的距离较远可以设计三对突变引物，先分别扩增四个片段，然后再将这四个片段放到一起使用两端引物进行搭桥扩增即可。
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5楼2016-04-06 08:10:08
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