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jiangpozi

新虫 (小有名气)

[求助] 多点突变求助已有3人参与

各位大侠好,我已经用质粒扩增,DPNI消化,然后转化获得了单点突变质粒,现在想要在突变3个位点,还用这种方法做,那怎么做呢?
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2016-04-05 20:50:29
同时突变3个,那就三对引物放进去同时做呗

请问可以这么做吗?引物之间退火温度不一样,还有它们会连起来吗?
4楼2016-04-05 22:55:35
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

有没有人指导下呢
2楼2016-04-05 15:04:41
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


同时突变3个,那就三对引物放进去同时做呗

发自小木虫Android客户端
3楼2016-04-05 20:50:29
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猛兽

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-05 22:55:35
请问可以这么做吗?引物之间退火温度不一样,还有它们会连起来吗?...

可以以构建好的质粒为模板再一个一个构建,当然这样做很麻烦,需要三次克隆构建过程。如果这三个突变之间的距离较远可以设计三对突变引物,先分别扩增四个片段,然后再将这四个片段放到一起使用两端引物进行搭桥扩增即可。
5楼2016-04-06 08:10:08
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