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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 多点突变求助
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

[求助] 多点突变求助 已有3人参与

各位大侠好，我已经用质粒扩增，DPNI消化，然后转化获得了单点突变质粒，现在想要在突变3个位点，还用这种方法做，那怎么做呢?
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1楼 2016-04-05 14:56:12
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-15 15:21:28
主要是我现在设计的是DPNI消化的方法，而且片段都在质粒上了...

那方法一样的，质粒不大的话就可以直接设计引物做overlap，再用酶消化即可。如果质粒太大，建议把你的片段从质粒上切下来做完突变再连进去，我个人推荐后者

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14楼2016-04-15 22:35:48
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
有没有人指导下呢
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2楼2016-04-05 15:04:41
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

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3楼2016-04-05 20:50:29
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jiangpozi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2016-04-05 20:50:29
同时突变3个，那就三对引物放进去同时做呗

请问可以这么做吗？引物之间退火温度不一样，还有它们会连起来吗？
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4楼2016-04-05 22:55:35
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