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yeruge

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-07 13:01:45
那我 能用现在的引物取做吗?...

不行的,你先看看说明书吧

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11楼2016-04-07 21:33:57
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

可以用overlap PCR,想突变几个就突变几个

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12楼2016-04-09 12:39:28
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-09 12:39:28
可以用overlap PCR,想突变几个就突变几个

主要是我现在设计的是DPNI消化的方法,而且片段都在质粒上了
13楼2016-04-15 15:21:28
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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13楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-15 15:21:28
主要是我现在设计的是DPNI消化的方法,而且片段都在质粒上了...

那方法一样的,质粒不大的话就可以直接设计引物做overlap,再用酶消化即可。如果质粒太大,建议把你的片段从质粒上切下来做完突变再连进去,我个人推荐后者

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14楼2016-04-15 22:35:48
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-15 22:35:48
那方法一样的,质粒不大的话就可以直接设计引物做overlap,再用酶消化即可。如果质粒太大,建议把你的片段从质粒上切下来做完突变再连进去,我个人推荐后者
...

我的质粒5400bp ,片段1400bp,
15楼2016-04-18 10:45:05
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-18 10:45:05
我的质粒5400bp ,片段1400bp,...

那我建议你把片段切下来,纯化出来当作模板,突变之后再连进去就可以了

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16楼2016-04-18 13:35:01
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-18 13:35:01
那我建议你把片段切下来,纯化出来当作模板,突变之后再连进去就可以了
...

我现在是以一个突变体质粒为模板,再P另一个突变体,但是测序发现本来以突变体为模板的那个突变点又变回原来的了,得到的只有一个点的突变,这好郁闷啊!
17楼2016-04-20 14:38:13
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by jiangpozi at 2016-04-20 14:38:13
我现在是以一个突变体质粒为模板,再P另一个突变体,但是测序发现本来以突变体为模板的那个突变点又变回原来的了,得到的只有一个点的突变,这好郁闷啊!...

第一个突变质粒测序了吗?

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18楼2016-04-21 12:51:47
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

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18楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-21 12:51:47
第一个突变质粒测序了吗?
...

测序了,是突变的,我想着不应该会突变回去啊,所以我再做一次,希望是我那错了模板PCR
19楼2016-04-21 13:53:46
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jiangpozi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 江苏虞游 at 2016-04-09 12:39:28
可以用overlap PCR,想突变几个就突变几个

请问下,我P质粒的时候会不会质粒上的碱基也会有突变呀,我测序了目的片段是正确的,这就可以用这个质粒了吗?我担心质粒会不会有变化。
20楼2016-04-28 16:56:53
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