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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » EDC/NHS偶连实验，如何在两种缓冲溶液中转换？谢谢！
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weiwei619

金虫 (小有名气)

[求助] EDC/NHS偶连实验，如何在两种缓冲溶液中转换？谢谢！ 已有3人参与

我在做EDC/NHS偶连实验，但是看文献中缓冲溶液是先在MES（ph=4-6）中活化，然后在PBS里偶联。我不明白我的材料如何在两种缓冲溶液中转换？求大神指导！谢谢！
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1楼 2016-03-25 21:54:19
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iceberg132

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

If your material is solid(like film or fibers), you just take out it from MES buffer and then put it into PBS buffer.
If your material is water soluble(like protein) , you have to adding NaOH to the previous solution and change pH to 7.5-8.
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21楼2016-04-12 21:38:27
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luolilan

银虫 (正式写手)
我觉得是应该用酸性的缓冲液活化，以后再偶联，活化的时候先不要加氨基啊

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6楼2016-03-25 23:34:36
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luolilan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by weiwei619 at 2016-03-26 09:56:47
小分子在MES中，而BSA在PBS中，这两者混一起那不是既有MES又有PBS，而且可能整体PH值也变了吧，感觉好乱...

小分子是带氨基的吗

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12楼2016-03-26 09:58:58
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luolilan

银虫 (正式写手)
偶联什么

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2楼2016-03-25 22:43:36
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luolilan

银虫 (正式写手)
活化什么

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3楼2016-03-25 22:43:58
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weiwei619

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luolilan at 2016-03-25 22:43:36
偶联什么

活化BSA蛋白质上的羧基，与带氨基的小分子染料偶联。文献中是说EDC,NHS和蛋白质先在ph=4-6的缓冲溶液中活化，再在PH=7.4的PBS中进行偶联。实在不会两种溶液怎么换的？
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4楼2016-03-25 23:17:59
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luolilan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weiwei619 at 2016-03-25 23:17:59
活化BSA蛋白质上的羧基，与带氨基的小分子染料偶联。文献中是说EDC,NHS和蛋白质先在ph=4-6的缓冲溶液中活化，再在PH=7.4的PBS中进行偶联。实在不会两种溶液怎么换的？...

蛋白质应该是有氨基的，羧基在活化的时候如果有氨基就跟它反应了，PBS缓冲液只是为了保护蛋白，

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5楼2016-03-25 23:31:53
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luolilan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weiwei619 at 2016-03-25 23:17:59
活化BSA蛋白质上的羧基，与带氨基的小分子染料偶联。文献中是说EDC,NHS和蛋白质先在ph=4-6的缓冲溶液中活化，再在PH=7.4的PBS中进行偶联。实在不会两种溶液怎么换的？...

应该是先活化羧基，活化的时候不要加氨基，活化一定时间后，再将带氨基的物质和ph等于7.4的pbs缓冲液一起加进去，这样氨基就会和羧基反应了，而且我怎么感觉有问题啊，你确定是活化BSA上的羧基吗？如果我没记错的话，BSA是有氨基的，你是不是讲BSA和小分子弄反了。

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7楼2016-03-25 23:41:47
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luolilan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weiwei619 at 2016-03-25 23:17:59
活化BSA蛋白质上的羧基，与带氨基的小分子染料偶联。文献中是说EDC,NHS和蛋白质先在ph=4-6的缓冲溶液中活化，再在PH=7.4的PBS中进行偶联。实在不会两种溶液怎么换的？...

PBS的作用就是为了保护蛋白的啊，不然可以直接用水不是吗？所以，我猜应该是活化小分子染料上的羧基，之后再将BSA溶解在PH等于7.4的PBS中，利用蛋白上的氨基与活化后的羧基反应，反正我做的实验是这样的步骤，不知道为何你的是反的

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8楼2016-03-25 23:49:43
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luolilan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
所以，你再好好研究研究

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9楼2016-03-25 23:50:53
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luolilan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by weiwei619 at 2016-03-25 23:17:59
活化BSA蛋白质上的羧基，与带氨基的小分子染料偶联。文献中是说EDC,NHS和蛋白质先在ph=4-6的缓冲溶液中活化，再在PH=7.4的PBS中进行偶联。实在不会两种溶液怎么换的？...

建议使用PH等于5的缓冲液进行活化

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10楼2016-03-26 00:01:05
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