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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切质粒图切成这样，
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scofield111

银虫 (正式写手)

[求助] 双酶切质粒图切成这样， 已有2人参与

Marker，是1000的ladder，1,3是EcoRI和HindIII切得质粒，理论一个7000多，一个几个bp，2是原质粒，双酶切37℃，4h，10ul的体系，1ul buffer，0.2ul的EcoRI和HindIII,0.2质粒，8.4的ddH2O。
问题1，为什么marker分不出来，凝胶是1%的，该怎样调整？
问题2，为什么酶切成分条段的？
上图，谢谢各位老师师兄的回答，非常感谢！

双酶切质粒图切成这样，
@R][EZ6)I9NNI`1JL}Z02QQ.png
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1楼 2016-03-14 10:21:33
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我傻傻分不清你说的123是指哪个泳道，最好能标明下。你质粒的浓度也够高了，0.2做酶切就能这么亮的条带，可以稀释做下酶切，你说marker分不开什么意思，你图上的那两个条带多的不是marker么，感觉分开的还好吧。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-03-14 11:55:08
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scofield111

银虫 (正式写手)
sorry, 自左向右是marker，1,2,3
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3楼2016-03-14 11:58:38
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scofield111

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-14 11:55:08
我傻傻分不清你说的123是指哪个泳道，最好能标明下。你质粒的浓度也够高了，0.2做酶切就能这么亮的条带，可以稀释做下酶切，你说marker分不开什么意思，你图上的那两个条带多的不是marker么，感觉分开的还好吧。
...

最左边的是marker，然后第一个和第三个才是双酶切后的，第二个是原质粒
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4楼2016-03-14 12:00:14
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scofield111

银虫 (正式写手)
标记了
双酶切质粒图切成这样，-1
H}8N7%%M1UZ2}WMEFH2SH]I.png
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5楼2016-03-14 12:02:44
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by scofield111 at 2016-03-14 12:02:44
标记了

H}8N7%%M1UZ2}WMEFH2SH]I.png

marker分离效果不好，一方面可以减少上样量，另一方面不知道你用的是什么染料，我们之前用biored对这些大片段marker染色效果不好。你如果不标明我还真以为那些条带多就是marker呢，你那两个酶是单克隆位点么，质粒酶切量可以稍微加大些，这样酶切是为了处理载体么？

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
6楼2016-03-14 12:11:15
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骆明亮

新虫 (小有名气)
哇

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7楼2016-03-14 12:44:16
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骆明亮

新虫 (小有名气)
双酶切怎么是这样啊，我之前做的是甜柿DNA双酶切，不是这样的吧

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8楼2016-03-14 12:44:56
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scofield111

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 骆明亮 at 2016-03-14 12:44:56
双酶切怎么是这样啊，我之前做的是甜柿DNA双酶切，不是这样的吧

应该是只有两个条带，或一个条带

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9楼2016-03-14 14:15:04
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是两个不同厂家的酶用了同一个缓冲buffer体系

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2016-03-14 17:10:44
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