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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 双酶切为什么会切出来这么多条带？
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陈硕

铜虫 (正式写手)

[求助] 双酶切为什么会切出来这么多条带？ 已有3人参与

我是对质粒进行双酶切，用的是BamH I 和EcoR V这两个酶，采用20微升酶切体系。Marker 是15000的，四个样的双酶切目的条带在1650bp左右的位置，最右侧的一个是对照，对照质粒酶切下来的条带是400bp左右。为什么我得到的重组质粒双酶切会出现这么多条带的情况？该如何避免？单酶切一切正常。第二个图是单酶切。

双酶切为什么会切出来这么多条带？
双酶切1o 2016-03-10 21 时 05 分.jpg


双酶切为什么会切出来这么多条带？-1
EcoRV单酶切条带 5号112016-03-10 18 时 46 分.jpg
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1楼 2016-03-10 21:36:39
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太阳花99

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
32楼: Originally posted by 陈硕 at 2017-06-08 13:46:09
最好上个图，这样看的明白。还有，空载质粒也需要切成线性的，这样才能更好比对出条带大小。
...

两个图，第一个图是没有酶切的，左起2-4孔为单克隆挑菌提取质粒跑胶，对应第二个图的4-6孔质粒酶切跑胶结果，第一个图的第5孔为没有酶切的空载质粒对应第二张图的第二孔酶切的空载质粒跑胶图，左边marker为2000的右边为takara1kb的，不明白为啥没有酶切的只有一条带，酶切后有三条呢？用的Ecor1和HINDⅢ,理论上只有这两个酶切位点目的基因400bp左右，载体7000多bp
双酶切为什么会切出来这么多条带？-2


双酶切为什么会切出来这么多条带？-3



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35楼2017-06-08 14:58:28
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生科深似海

新虫 (小有名气)
先把质粒送去测序吧

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

陈硕
2楼2016-03-10 22:06:17
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岁月静好12

铁虫 (小有名气)
还有相同的酶切位点

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

陈硕
怒放的生命
3楼2016-03-10 22:28:27
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陈硕: 金币+5 2016-03-14 10:33:50
切成marker了，啥质粒这么牛!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2016-03-11 08:44:35
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