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在实验室实习，看到takara公司的pmd19T载体说明书上说16℃连接三十分钟，而实验室的师兄师姐都是过夜连接？差别大么？如果时间比较赶该怎么做？谢谢各位！ 发自小木虫Android客户端 |
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ddt123456789
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过夜连接差别不大，都是利用taq在扩增时末端多出来一个A和载体上的T互补配对，连接的体系会达到一个动态平衡，一般公司推荐的连接时间会有些富余，你可以试试缩短时间，看最终连接效果摸出一个能接受的最短时间。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-06 17:05:56
3楼2016-03-06 17:56:08
jackyoung
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【答案】应助回帖
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这个连接还是要看个人习惯和实验安排的，我们用过22连接一到两个小时的，照样可以达到实验需要，这和具体实验有关。克隆做多了，熟练了，就不会纠结这么些细节了，时间紧就缩短点时间，安排不过来就放过夜，大部分人选择过夜主要是用一些T4连接酶保留的习惯，到T载也懒得改，对实验影响也不大。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-03-06 19:42:41
6楼2016-03-06 22:09:36
ddt123456789
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公司为了能把产品卖出去，肯定不会给一份错误的protocol，所以可以大胆地按照protocol来，根据本科实习的经验来看，过夜对效率的提升并不明显。因为Taq保真度的问题，现在都改用高保真酶，所以基本上T载体就用不着了 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-03-07 00:07:43
