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璇玑lexi

新虫 (小有名气)

[交流] 求助求助!转录因子的克隆!

目前我的研究方向是关于调控异黄酮合成的转录因子的功能研究,已确定一MYB类的转录因子(CDS:1008bp)进行克隆,该转录因子AT含量较高,经克隆后连接pMD18-T载体进行测序,共测序3次,9个样品,9个测序结果均是在转录因子前274bp左右的片段存在大量非特异性扩增片段,报告显示该区域存在高级结构。274bp-1008bp的测序序列与原序列基本一致,9个测序样品之间的Identity达到99.5%以上。将测序序列输入NCBI进行BLAST比对,结果均为我要克隆的转录因子。
                   现请教:根据测序结果,我是否可以采用测序序列继续进行下一步试验?存在高级结构是否会对转录因子的翻译产生影响?还是重新克隆该转录因子?如何能够获得与原序列一致的片段?
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2楼2015-04-24 21:58:19
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3楼2015-04-24 21:59:40
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4楼2015-04-24 22:02:18
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5楼2015-04-24 22:04:30
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6楼2015-04-24 22:11:08
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7楼2015-04-24 22:22:31
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8楼2015-04-24 22:25:47
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crescent010

铁虫 (初入文坛)

大神请问下你克隆myb转录因子是从转录组中找的么?你克隆前的序列orf是完整的么?
9楼2015-05-11 16:06:07
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