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分类	共搜索到 124 个相关话题(最多显示前5000个)	作者	最后发表

微生物	pcp20和pkd46 在做red同源重组时发现pcp20和pkd46的质粒提取完后是多条条带。质粒提取的问题可以排除，因为提取其他的质粒是没有问题的。请大家帮忙分析一下是什么原因。1.买来的质粒使用42度热激转进DH5...	captainkai	2024-08-25 09:16
微生物	Red同源重组筛选用大肠杆菌做Red重组，工作质粒是pKD46，电转后平板菌落生长正常，但都是假阳性，RT-pcr显示pKD46和Donor两个质粒都存在菌内并已经表达，但是菌落pcr显示目的片段未敲除/敲入，请问如何能更...	壶壶亚亚la	2024-07-09 08:39
硕博家园	乳酸菌敲除基因的实验应该怎么选择质粒呢？新人求助：看了很多植物乳杆菌的基因敲除文献，几乎每篇文章都不一样，有pLPK，pFED760，pLCNICK，pKD46，pNZ5319等等，所以为什么这些文章中的质粒都不一样，对于植物乳杆菌的基因敲除实验...	Lxw302	2023-08-31 02:04
分子生物	微生物电转把质粒pKD46电转入革兰氏阴性菌中，电转后在Amp抗性的板子上生长，进行菌液PCR检测不到质粒。空感受态在抗性的板子上不长。wizardfanbiostar2009	莹军99	2023-07-17 12:44
微生物	求pdg1730或者其它枯草整合型质粒求pDG1730质粒，交换，我们实验室有PKD46，PCP20，PKD4天使托	zljg8260	2023-04-04 06:20
微生物	pkd46电转请教下，我将pkd46电转到大肠杆菌中，涂板，挑取单菌落，1.5ep管摇菌，经pcr鉴定，在大肠中有pkd46，但取ep管的菌液，再接种到15ml管中摇菌重新鉴定却没pkd46，这是怎么回事？有没解决办法...	没有户用名	2022-10-13 03:16
论文投稿	red同源重组最近几个月做red同源重组，敲除杆状病毒聚合酶基因，设计的同源臂长度有50bp，然后将pkd46转入到DH10Bac感受态细胞中，做感受态时是先摇两个小时，然后加入10%的阿拉伯糖继续诱导，oD值到0....	CSK1	2022-03-11 01:38
分子生物	pkd46质粒把pkd46质粒和别的片段连接时用什么方法好，或者需要注意什么biostar2009youlinglywwizardfan	zljg8260	2022-01-07 03:21
分子生物	pkD46敲除Red重组，出来的单菌落杂合，pCR结果显示既有敲除打靶... pkD46敲除Red重组，出来的单菌落杂合，pCR结果显示既有敲除打靶片段又有原片段打靶片段是PCR产物，上同源臂200bp+下同源臂200bp+SacBKanagene+下同源臂200bp（下同源臂出现两次是为了，第一...	张小蛋	2021-09-07 12:04
分子生物	肺克基因敲除问题本人采用red重组敲除，目的片段750bp左右，先电转入含四环素抗性的pKD46质粒，然后用阿拉伯糖诱导重组酶表达后制作成感受态，电击转化入重组片段（含上下游同源臂各250bp，卡那霉素抗性基因...	garakutadoll	2021-09-03 04:15
分子生物	red重组各位分子生物学的大佬，最近在做RED重组，因为菌株不带有T7RNA聚合酶基因，通过red重组整合到基因组上了，但是去过PKD46质粒后，打算转化pcp20质粒去除KM抗性片段，转化后发现无法在Cm或者...	求学1	2020-12-17 03:21
分子生物	【求助/交流】假单胞菌RED重组系统最后检验PCR没有条带然后电转化到带有Pkd46的假单胞菌感受态（制备感受态前大摇用了L-阿拉伯糖诱导过，制备感受态用的是10%的甘油多次离心，全程4度制备），10ul的目的片段+100ul的感受态混匀冰浴30min后电转，...	Anthony07	2020-06-08 02:10
分子生物	求助能在肠球菌中进行基因敲除的质粒各位，我们相对肠球菌进行基因敲除操作，请有相关质粒的同学老师赠送或我们购买一些。我们有大肠杆菌基因敲除质粒pKD46以及模板质粒pKD13，可以相互交换，谢谢！	icesea	2020-03-03 08:41
资源求助	求大肠杆菌crispr/cas9质粒，可以pKD4/pKD46/pCP20/pCas SA质粒... 本人新手，用Red重组法做大肠杆菌基因敲除一直不成功，已经卡在同源重组一个多月，都是假阳性，最近查阅文献想试试cas9技术，希望有相关质粒的大神可提供帮助。谢谢大佬们帮助！	寒冬夜寂	2019-12-17 09:54
分子生物	Red同源重组，大肠杆菌EDL933同源重组效率低是什么原因啊？萌新最近开始做Red同源重组来敲除大肠杆菌O157(EDL933)中的一个基因，我用的是pKD4pKD46pCP20这三个质粒，从DH5a中提取出来就PCR验证了，证明质粒没有问题，现在已经得到了pKD46/O157重组子...	寒冬夜寂	2019-12-03 01:27
分子生物	使用JQ200SK自杀质粒敲除BL21(DE3)基因组基因的问题在进行基因敲除的实验，想采用自杀性质粒pJQ200SK来做基因敲除，宿主细胞是BL21(DE3)，请问在敲除过程中，需要先使用pKD46诱导重组酶么？还是直接把带同源序列的目的基因用pJQ200SK直接转化...	songxiawu	2019-11-25 02:01
分子生物	有没有大神做过pkd46更换抗性呢？因为宿主菌自带Amp抗性，所以原本的pkd46抗性筛选不能用，想更换kan或者Cm，但是发现没有好用的酶切位点，所以线性化质粒是反向扩增得到的，但是之后重组了很多遍都没重组上，我想问一下有...	fairy2015	2019-09-18 09:25
硕博家园	求助pcp20质粒求助pCP20质粒，手中有pACYC184，pFPV25.1，pKD4,pKD46及其它一些真核、原核表达载体，可交换。	mzchongchong	2019-08-19 02:12
分子生物	red敲除沙门菌敲除基因转化PKD46后不生长沙门菌z做基因敲除，电转PKD46之后，复苏涂板后在氨苄抗性的平板上长出，但挑单克隆接菌后不生长，不知道是哪里出了问题呢？新手求解	dblydxdl	2019-08-17 08:16
硕博家园	求质粒PKD46 已找到	Sw17	2019-07-22 02:30
微生物	pkd46蛋白不表达我把加了阿拉伯糖的pkd46菌液裂解了跑SDS-PAGE，和不加诱导剂的组别相比，看不见red系统的蛋白表达，请问可能是什么原因啊？谢谢。	rainontime	2019-07-09 08:00
资源求助	求沙门菌基因敲除质粒本新虫最近想做一个沙门氏菌里面基因的敲除，向大神求助质粒：我查文献有PKD4/PKD46/PCP20可以做还有pGMB151可以交换质粒，我们有蛋白表达质粒，链霉菌敲除质粒，还有一些沙门菌诱导型表达...	安中扈三娘	2019-05-05 12:47
分子生物	求pkd3质粒或者交换pkd13 pkd46 pcp20 pet28等最近在做基因敲除，因为我的菌对kan有抗性，不能用pkd13，只能用cm抗性的pkd3，如果哪位朋友有pkd3的话，求惠赠或者求交换（金币质粒或者其他都行）求惠赠！感恩！	盐水花生	2019-04-11 08:26
微生物	λ-red重组体系插入片段大小各位前辈，我想要向MG1655里插入一段片段，这个片段好长，有4000多，请问用pKD46质粒的话，能插进去吗？谢谢！	rainontime	2019-03-19 07:45
硕博家园	求pKD46和pCP20载体！万分感谢本人最近要开始做red同源重组，请问有没有人有pKD46和pCP20这两种质粒吗？能否分享我一点点，万分感谢各位站友！	cjw_0926	2018-12-19 01:28