应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 肺克基因敲除问题
271/1返回列表
查看: 2085  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

garakutadoll

新虫 (初入文坛)
已领完
肺克基因敲除问题
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

本人采用red重组敲除，目的片段750bp左右，先电转入含四环素抗性的pKD46质粒，然后用阿拉伯糖诱导重组酶表达后制作成感受态，电击转化入重组片段（含上下游同源臂各250bp，卡那霉素抗性基因作为插入片段，总长2000bp），但是第二天平板上都没有菌落生长

考虑问题：1.重组片段是不是太长，与目的基因长度相差太大导致重组失败

2.电转效率低，当时电转质粒时只获得一个克隆，可能是感受态制作不行？肺克荚膜很厚，离心的时候很难离到底，是否有解决方法？能否用固体培养基做阿拉伯糖的诱导？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2021-09-03 12:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

张小蛋

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我敲除的是大肠杆菌，上下同源臂200多bp,筛选标记也是卡纳，整个重组片段4000bp左右，转化完后长了三十多个菌落，片段都敲上去了，但是发现好像完成的是单交换，野生型和重组片段都能检测出来，也很是头疼，估计你这个首先要解决的是电转效率的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2021-09-04 11:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粥小怡

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您好，请问您的问题解决了吗？是因为片段太大了吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
22楼2021-10-31 00:55:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

garakutadoll

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 粥小怡 at 2021-10-31 00:55:30
您好，请问您的问题解决了吗？是因为片段太大了吗？

解决了，用50bp的同源臂成功了
赞一下 回复此楼
23楼2021-12-06 13:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

garakutadoll

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 张小蛋 at 2021-09-04 11:13:51
我敲除的是大肠杆菌，上下同源臂200多bp,筛选标记也是卡纳，整个重组片段4000bp左右，转化完后长了三十多个菌落，片段都敲上去了，但是发现好像完成的是单交换，野生型和重组片段都能检测出来，也很是头疼，估计你这 ...

多挑几个LB培养过夜再测，我做出来了，测了快30个菌落才有一个双交换
赞一下 回复此楼
24楼2021-12-06 13:03:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sh孙浩

新虫 (小有名气)
加一下wx 15137688280 同做质粒的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
25楼2021-12-07 10:04:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MAIT

新虫 (小有名气)
请问楼主解决了吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
26楼2022-04-28 00:26:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lucklizhen

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个敲除我可以帮你做，愿意的话私信吧

[ 发自手机版 https://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
27楼2022-04-30 12:24:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
秋土豆香2楼
2021-09-03 12:49   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
tzynew3楼
2021-09-03 12:50   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
Miya0074楼
2021-09-03 13:12   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
whiteheads5楼
2021-09-03 13:19   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
wyj9706楼
2021-09-03 13:33   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
南宫紫玉7楼
2021-09-03 13:33   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
muhong19828楼
2021-09-03 13:43   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
nono20099楼
2021-09-03 14:14   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
stylelife610楼
2021-09-03 15:54   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
Michael98911楼
2021-09-03 19:17   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
阿文52112楼
2021-09-03 22:02   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
张小蛋13楼
2021-09-04 11:10   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
逐梦而来15楼
2021-09-04 22:47   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
willzhuu16楼
2021-09-05 19:34   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
冰山雪莲灯17楼
2021-09-06 14:14   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
Acov18楼
2021-09-06 15:39   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
归来时19楼
2021-09-12 21:21   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
归来时20楼
2021-09-12 21:21   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
归来时21楼
2021-09-12 21:21   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
相关版块跳转 我要订阅楼主 garakutadoll 的主题更新
271/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +8 呼呼？~+123456 2026-03-08 11/550 2026-03-14 20:57 by 娄娄虫
[考研] 化学调剂0703 +5 啊我我的 2026-03-11 5/250 2026-03-14 19:34 by 哦哦123
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-08 8/400 2026-03-14 04:25 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +5 Xinyu Wu311 2026-03-09 5/250 2026-03-14 03:05 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:55 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
[考博] 求材料读博院校 +9 yanglei131 2026-03-08 9/450 2026-03-10 11:54 by 天道酬勤2026686
[考研] 家人们 调剂不迷路 看这里 +8 likeihood 2026-03-09 13/650 2026-03-10 08:09 by likeihood
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭