应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 肺克基因敲除问题
51/1返回列表
查看: 1962  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

garakutadoll

新虫 (初入文坛)
已领完
肺克基因敲除问题
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

本人采用red重组敲除，目的片段750bp左右，先电转入含四环素抗性的pKD46质粒，然后用阿拉伯糖诱导重组酶表达后制作成感受态，电击转化入重组片段（含上下游同源臂各250bp，卡那霉素抗性基因作为插入片段，总长2000bp），但是第二天平板上都没有菌落生长

考虑问题：1.重组片段是不是太长，与目的基因长度相差太大导致重组失败

2.电转效率低，当时电转质粒时只获得一个克隆，可能是感受态制作不行？肺克荚膜很厚，离心的时候很难离到底，是否有解决方法？能否用固体培养基做阿拉伯糖的诱导？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2021-09-03 12:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sh孙浩

新虫 (小有名气)
加一下wx 15137688280 同做质粒的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
25楼2021-12-07 10:04:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

张小蛋

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我敲除的是大肠杆菌，上下同源臂200多bp,筛选标记也是卡纳，整个重组片段4000bp左右，转化完后长了三十多个菌落，片段都敲上去了，但是发现好像完成的是单交换，野生型和重组片段都能检测出来，也很是头疼，估计你这个首先要解决的是电转效率的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2021-09-04 11:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
秋土豆香2楼
2021-09-03 12:49   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
tzynew3楼
2021-09-03 12:50   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
Miya0074楼
2021-09-03 13:12   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
whiteheads5楼
2021-09-03 13:19   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
wyj9706楼
2021-09-03 13:33   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
南宫紫玉7楼
2021-09-03 13:33   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
muhong19828楼
2021-09-03 13:43   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫IOS客户端
nono20099楼
2021-09-03 14:14   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
stylelife610楼
2021-09-03 15:54   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
Michael98911楼
2021-09-03 19:17   回复  
garakutadoll(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
阿文52112楼
2021-09-03 22:02   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
张小蛋13楼
2021-09-04 11:10   回复  
garakutadoll(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
查看全部 27 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭