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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » red敲除 沙门菌敲除基因转化PKD46后不生长
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dblydxdl

新虫 (初入文坛)

[求助] red敲除 沙门菌敲除基因转化PKD46后不生长 已有1人参与

沙门菌z做基因敲除，电转PKD46之后，复苏涂板后在氨苄抗性的平板上长出，但挑单克隆接菌后不生长，不知道是哪里出了问题呢？新手求解
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1楼 2019-08-17 16:39:16
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
假阳性，质粒在里面不复制

发自小木虫Android客户端
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2楼2019-08-17 18:28:33
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-08-18 22:00:09
隔天长的单克隆点多吗？正常操作是挑到克隆摇菌，做PCR，另加测序验证，可是你说了菌都长不起来，所以怀疑是假阳性或者是你摇菌操作有问题。
我最近也涉及敲除，多交流。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
3楼2019-08-18 15:54:41
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dblydxdl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2019-08-18 15:54:41
隔天长的单克隆点多吗？正常操作是挑到克隆摇菌，做PCR，另加测序验证，可是你说了菌都长不起来，所以怀疑是假阳性或者是你摇菌操作有问题。
我最近也涉及敲除，多交流。
...

重新挑了克隆，长起来了，可能是之前的单克隆有问题
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4楼2019-08-20 12:36:11
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dblydxdl at 2019-08-20 12:36:11
重新挑了克隆，长起来了，可能是之前的单克隆有问题...

那就好，实验有进展就是最大的欣慰啊。
对了，想问一下，你手上的pKD46质粒，能不能友情赠送一点点呢？我这边只有常规的pET系列。
赞一下 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
5楼2019-08-20 17:15:56
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dblydxdl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by prthefu at 2019-08-20 17:15:56
那就好，实验有进展就是最大的欣慰啊。
对了，想问一下，你手上的pKD46质粒，能不能友情赠送一点点呢？我这边只有常规的pET系列。...

sorry,sorry~不太方便了，我用的也是别人的，我现在连个科研新手都算不上
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2019-08-24 18:04:00
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