应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用基因组DNA当模版为何扩增出CDS
131/2返回列表12下一页
查看: 3548  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weiweitt

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用基因组DNA当模版为何扩增出CDS 已有3人参与

1.目的条带包含2个外显子加1个内含子，全长约700bp.内含子稍大于100bp。
2.用CTAB法提取植物叶片的基因组DNA做模版
3.扩增出两条带一条700bp左右正是目的条带。另一条大小500bp多，切胶回收连载体测序后发现正好是两个外显子相加没用内含子的部分，
也就是说，我用基因组DNA扩增出了CDS，请问会有什么样的可能来解释这一现象？
PS：怀疑我的DNA可能有RNA的污染，我于是将DNA用RNA酶消化了一个小时，结果仍是上述结果。

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-02-19 00:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiweitt

铁虫 (初入文坛)
这个帖子会有人看见么？第一次发
赞一下 回复此楼
2楼2016-02-19 11:17:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by weiweitt at 2016-02-19 11:17:04
这个帖子会有人看见么？第一次发

已经被看了20次……
但是真的不知道什么原因，按理来讲，就算有RNA污染也不会出现不含内含子的CDS片段，因为PCR酶是要以DNA为模板才能进行扩增的，RNA是不行的，难道是样品里面的RNA已经被逆转录了……好神奇~
赞一下 回复此楼
3楼2016-02-19 12:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adamhe

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
搞笑，只有DNA酶没用
赞一下 回复此楼
4楼2016-02-19 16:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qing_eve

金虫 (正式写手)
跨内含子设计两对引物，所得产物在进行全长PCR
赞一下 回复此楼
5楼2016-02-20 15:11:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redking2012

木虫 (正式写手)
测序呗

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
6楼2016-02-20 19:43:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)
只能一笑而过，RNA能用DNA POL扩也是神了。要是实验室里的什么东西污染了就很正常不过了。还有，万一要是个转基因的呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
CestLaVie
7楼2016-02-21 00:14:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiweitt

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qing_eve at 2016-02-20 15:11:52
跨内含子设计两对引物，所得产物在进行全长PCR

我的引物就是跨着内含子，扩出来的东西就应该是外+内+外 这样一段东西，结果我扩增出了两条带，把这两条带都回收测序了，一条就是预期的外+内+外，另一条是外+外，中间100多bp的内含子没有了。所以我不明白多出来的这条带是怎么回事，实验做过好几次了，DNA都重提好几次了，哦 引物我也换过一次更长一点的也这样
赞一下 回复此楼
8楼2016-02-23 15:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiweitt

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by adamhe at 2016-02-19 16:38:42
搞笑，只有DNA酶没用

实在想不明白为啥能扩出来CDS才来向大家求教的，见笑了
赞一下 回复此楼
9楼2016-02-23 15:30:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiweitt

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by weiweitt at 2016-02-23 15:28:31
我的引物就是跨着内含子，扩出来的东西就应该是外+内+外 这样一段东西，结果我扩增出了两条带，把这两条带都回收测序了，一条就是预期的外+内+外，另一条是外+外，中间100多bp的内含子没有了。所以我不明白多出来的 ...

哦不好意思，没太看懂您的建议，能说的仔细些吗
赞一下 回复此楼
10楼2016-02-23 15:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weiweitt 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +5 炎黄贵胄 2026-08-22 6/300 2026-08-24 06:34 by sincosx
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭