24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 3251  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weiweitt

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用基因组DNA当模版为何扩增出CDS 已有3人参与

1.目的条带包含2个外显子加1个内含子,全长约700bp.内含子稍大于100bp。
2.用CTAB法提取植物叶片的基因组DNA做模版
3.扩增出两条带一条700bp左右正是目的条带。另一条大小500bp多,切胶回收连载体测序后发现正好是两个外显子相加没用内含子的部分,
也就是说,我用基因组DNA扩增出了CDS,请问会有什么样的可能来解释这一现象?
PS:怀疑我的DNA可能有RNA的污染,我于是将DNA用RNA酶消化了一个小时,结果仍是上述结果。

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiweitt

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qing_eve at 2016-02-20 15:11:52
跨内含子设计两对引物,所得产物在进行全长PCR

我的引物就是跨着内含子,扩出来的东西就应该是外+内+外 这样一段东西,结果我扩增出了两条带,把这两条带都回收测序了,一条就是预期的外+内+外,另一条是外+外,中间100多bp的内含子没有了。所以我不明白多出来的这条带是怎么回事,实验做过好几次了,DNA都重提好几次了,哦 引物我也换过一次更长一点的也这样
8楼2016-02-23 15:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

weiweitt

铁虫 (初入文坛)

这个帖子会有人看见么?第一次发
2楼2016-02-19 11:17:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by weiweitt at 2016-02-19 11:17:04
这个帖子会有人看见么?第一次发

已经被看了20次……
但是真的不知道什么原因,按理来讲,就算有RNA污染也不会出现不含内含子的CDS片段,因为PCR酶是要以DNA为模板才能进行扩增的,RNA是不行的,难道是样品里面的RNA已经被逆转录了……好神奇~
3楼2016-02-19 12:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adamhe

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
搞笑,只有DNA酶没用
4楼2016-02-19 16:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +8 超人不会飞@ 2026-04-08 8/400 2026-04-14 16:06 by zs92450
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 药学求调剂 +6 RussHu 2026-04-12 7/350 2026-04-14 15:16 by sxdj2
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 08工学 309分求调剂 +11 Yin DY 2026-04-08 11/550 2026-04-14 12:55 by fqwang
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +11 池池池池池池 2026-04-08 11/550 2026-04-13 14:10 by 科研论
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +8 慕绝cc 2026-04-09 8/400 2026-04-13 14:08 by 张zhihao
[考研] 求调剂288 +7 ioodiiij 2026-04-10 9/450 2026-04-13 08:33 by Hayaay
[考研] 2本,初试303,0860求调剂 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 0860004 求调剂 309分 +9 Yin DY 2026-04-08 9/450 2026-04-11 22:55 by dongdian1
[考研] 086003调剂求助 +21 苏弋万 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 20:25 by dongdian1
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 296求调剂 +6 汪!?! 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 085500求调剂材料 +10 易11122 2026-04-09 10/500 2026-04-11 10:39 by maddjdld
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
信息提示
请填处理意见