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王继楼马

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化问题,求教。 已有2人参与

我这两天在做连接转化,有两个对照组,一个是只加质粒,一个是只加目的基因。连接反应是平末端连接。

结果发现,只加质粒的对照组菌落只有两三个,但是只加目的基因的对照组菌落却有十几二十个,实验组有50-60个。

为什么只加目的基因的对照组长得这么多,不科学啊!我板子是Amp,按只加质粒对照组来看,amp是没有失效的。个人认为目的基因也没有污染,因为是从其他质粒上酶切胶回收来的,跑胶看过很单一。

这是怎么回事?!有大神知道吗?
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王继楼马

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yzc937168 at 2016-02-02 09:56:09
感觉酶切胶回收会带有一些完整质粒的污染,直接PCR目的基因试试。

有可能,我咨询了一下Technician。她也是这么说的。
7楼2016-02-04 21:04:56
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主您的目的基因怎么获得的?PCR的话,模板是啥?
2楼2016-02-02 08:56:19
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yzc937168

金虫 (小有名气)

感觉酶切胶回收会带有一些完整质粒的污染,直接PCR目的基因试试。

发自小木虫Android客户端
吼吼吼~
3楼2016-02-02 09:56:09
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sloop112

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2016-02-03 09:16:05
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