| 查看: 7679 | 回复: 14 | |||
[求助]
有关无缝克隆的，求助！！！！已有2人参与
|
|||
|
我最近要做无缝克隆，有以下问题，请各位大神帮忙，谢谢！！ 1：获得线性载体的话，是用一种酶切，还是用两种酶切？ 酶切之后都要割胶回收吗？ 2：无缝克隆的时候，需要考虑目的基因会不会移码这个问题吗？（这个是最重要的） 3：无缝克隆的时候，设计引物时，与线性载体重合的部分应该是是下图中 红色的一组 还是绿色的一组？ 请各位指导，谢谢！！！！！  问题3图.PNG |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有279人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2016-01-20 08:44:12
江苏虞游
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 3371.5
- 散金: 93
- 红花: 3
- 帖子: 547
- 在线: 80.6小时
- 虫号: 1088552
- 注册: 2010-09-03
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
10楼2016-02-29 16:30:13
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
那雨那女孩: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢！！第3个问题，我画了一下，发现太白痴了。谢谢！！！ 2016-01-19 16:04:56
感谢参与，应助指数 +1
那雨那女孩: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢！！第3个问题，我画了一下，发现太白痴了。谢谢！！！ 2016-01-19 16:04:56
|
1. 我推荐双酶切，因为双酶切可以最大程度避免载体自连，无缝克隆酶中有的会有连接酶存在。建议跑电泳，并做空白对照以确保切开。如果您的质粒不太大，我非常推荐使用反向PCR方式进行载体线性化，这样假阳性比较少。 2.一般基因都是自带ATG的吧，所以一般不需要考虑移码，如果是从质粒上的ATG开始翻译，那么需要考虑移码问题了。具体地方式跟传统的酶切连接是一样的。 3. 红色还是绿色我看不太懂，红色的应该跟质粒序列一样对吧，那就把红色的那段序列放到基因正向引物前面，后面红色那段方向互补之后，放到基因反向引物的前面就ok了 |
2楼2016-01-19 15:22:40
3楼2016-01-19 19:04:41
4楼2016-01-19 19:07:00
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2016-01-20 08:45:51
7楼2016-01-20 09:52:27
江苏虞游
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 3371.5
- 散金: 93
- 红花: 3
- 帖子: 547
- 在线: 80.6小时
- 虫号: 1088552
- 注册: 2010-09-03
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
8楼2016-01-21 01:04:30
9楼2016-01-22 10:35:09